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细胞核肌动蛋白与p53蛋白相互作用研究

顾春生  
【摘要】: 肌动蛋白普遍存在于各类细胞的细胞核中。近来研究表明,核内肌动蛋白不仅参与了染色质改构、mRNA加工和运输等许多重要的生理活动,还参与了RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ所介导的转录过程。本实验室前期的一些工作表明,核内肌动蛋白可以下调p53介导的p21基因转录,并且核内肌动蛋白与p53存在共沉淀现象。为了进一步研究肌动蛋白与p53相互作用的结构基础,本实验构建了谷胱甘肽S-转移酶标签(GST-tag)的肌动蛋白及其突变体,利用GST-pull down实验发现肌动蛋白N端的第1-18个氨基酸和C端第338-375氨基酸在肌动蛋白与p53相互作用过程中起到了重要的作用。随后利用GST-p53及其突变体进行了GST-pull down实验,发现p53 N端第1-44氨基酸为肌动蛋白与p53相互作用所必需。最后利用六聚组氨酸标签(His-tag)的肌动蛋白及其突变体与GST-p53进行GST-pull down实验,证明肌动蛋白与p53之间的作用是直接的。本研究结果为进一步探讨核内肌动蛋白参与基因转录调控的机制奠定了基础。


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