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Pseudomonas sp.DSDY0501菌株的选育及其PHB解聚酶酶学性质的研究

邸瑶  
【摘要】: 采集不同地区不同生态环境的土壤样品,并进行分离、筛选,获得一株可高效降解PHB的细菌菌株DSDY0501。通过形态学观察、生理生化特性试验和16S rDNA序列分析,初步鉴定其属于假单胞菌属。 对该菌株在以PHB为唯一碳源的培养基中的生长规律进行研究发现:DSDY0501菌株可在24h内将PHB粉末和PHB膜完全降解,其产生的PHB解聚酶在细胞生长的对数期合成及分泌,随细胞进入静止期,合成和分泌减少。 对DSDY0501菌株产生的PHB解聚酶进行分离纯化,通过Sephacryl S-200层析后分离出一种PHB解聚酶。酶的比活力达到2091.42 u/mg,纯化倍数为24.2,酶活回收率为16.61%。 对酶学性质进行表征。该酶属于单体酶,分子量为57.9KDa;最适反应温度为60℃,于最适反应温度下保温,半衰期为2.5h。最适反应pH为9.0,pH稳定范围为7.0-8.0;Cu2+、Fe3+、Mn2+等离子对酶有抑制作用;Ca2+、Mg2+、Zn2+和CO2+等离子对酶有轻微的激活作用;0.1% (w/v) SDS、0.5% (w/v)EDTA和4mol/L尿素对酶有抑制作用,5mM H2O2和0.5% (v/v)巯基乙醇对酶有激活作用;该酶的Km值为0.182mg/ml;应用CD光谱检测蛋白质的二级结构含有60%α-螺旋和40%β-折叠,不含有β-转角和无规则卷曲;质谱测定显示PHB解聚酶酶促降解PHB的产物主要是3-HB单体。


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