收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用

崔丽巍  
【摘要】: 随着转基因植物商业化,转基因植物的生物安全性,尤其是转基因植物中的抗性标记基因,受到了越来越多的关注。因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、微生物,对环境造成危害,以及植物产生意外的性状,从而引发食品或生态安全问题。 在植物遗传转化系统中,目前应用较为广泛的筛选标记基因主要有两大类:抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因。常用的抗性酶基因包括nptII基因、cat基因、hpt基因、bar基因等。转化的细胞可以在含有抗生素和除草剂的培养基中正常生长,因此利用这些标记基因的筛选体系都可能存在生物安全性问题,因而采用无害的正筛选系统进行植物遗传转化是基因工程的重要目标之一。 木糖筛选是一种正选择筛选体系,木糖异构酶基因(XylA)是一种安全的标记基因。我们首先通过七组对照实验确定木糖作为选择剂的最佳浓度。本实验以大肠杆菌XylA作为选择标记基因,利用木糖作为选择剂获得能够表达带有GUS报告基因的转基因黄瓜。同时,为了获得对肿瘤有积极作用的aFGF的单链抗体,本实验还构建了pX390-scFv载体,以木糖作为筛选剂,进行黄瓜遗传转化研究。本研究初步建立了农杆菌介导的基于木糖选择系统的黄瓜转化体系。以黄瓜真叶为外植体,预培养2天,以携带表达载体的农杆菌LBA4404侵染黄瓜,选择培养基添加1 mg/ml的2ip和1 mg/ml的2,4-D,待愈伤长出时,选择培养基添加0.3mg/ml的2ip。选择培养基中加入15g/L的木糖和15g/L的蔗糖,获得的转化效率较高。通过这套程序,我们获得了19株转基因黄瓜植株,通过PCR和GUS组织染色,初步证明12株为阳性植株。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陆晓春,薛庆中;转基因植物中标记基因的消除[J];生命科学;2001年02期
2 郑雪琴;;Cre/loxp重组系统在转基因植物中删除标记基因的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年01期
3 肖志新,周冀衡,杨虹琦,李鹏飞,黎娟;转基因植物选择性标记基因[J];中国农业科技导报;2004年05期
4 王兴春,杨长登;转基因植物生物安全标记基因[J];中国生物工程杂志;2003年04期
5 汪琛颖;转基因植物标记基因的研究进展[J];河南教育学院学报(自然科学版);2004年01期
6 董志峰,马荣才,彭于发,管华诗;转基因植物中外源非目的基因片段的生物安全研究进展[J];植物学报;2001年07期
7 黄曙光,石明旺,谭晓风;转基因植物标记基因的安全技术[J];生物学通报;2004年12期
8 郭春源;转基因作物风险有多大?[J];百科知识;2003年10期
9 王永飞,马三梅,亦如瀚;转基因植物选择标记基因及其安全性问题[J];植物生理学通讯;2004年05期
10 吴杨;贺俐;;PMI基因为筛选标记的抗旱表达载体构建[J];井冈山大学学报(自然科学版);2010年02期
11 侯学文,姜悦,郭勇;转基因植物中的标记基因[J];生物学通报;1997年10期
12 杨英军,周鹏;转基因植物中的标记基因研究新进展[J];遗传;2005年03期
13 王彩芬;;植物遗传转化中选择标记基因的研究进展[J];生物技术通报;2009年02期
14 孙磊;张国军;闫爱玲;徐海英;;木糖异构酶基因xylA的克隆及其表达载体的构建[J];生物技术通报;2011年07期
15 岳运锋;吴刚;武玉花;卢长明;;转基因植物中标记基因定性PCR检测方法研究[J];中国油料作物学报;2011年03期
16 孙国凤;;标记基因和过敏症等研究会的召开[J];生物技术通报;1993年11期
17 王平,李阜棣;标记基因在根圈细菌定殖研究中的应用[J];生物技术通报;1994年05期
18 王艳辉;张晓东;;转基因作物安全性的解决方法研究进展[J];生物技术通报;2009年08期
19 朱小君,胡征,毕万里,唐朝枢,周爱儒,汤健;外源性标记基因LacZ在大鼠血管平滑肌细胞中的表达[J];北京医科大学学报;1995年02期
20 程光潮,刘树俊,段章雄,张琦,王力,刘坤凡;利用标记基因选配褐壳蛋鸡配套杂交亲本[J];遗传;1996年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵德刚;吕立堂;李岩;刘洋;冯怡;Yi Li;;利用基因删除技术培育无选择标记转基因植物[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
2 齐广海;杜红方;;转基因植物及其作为饲料原料的安全性评价[A];家禽营养与饲料科技进展——第二届全国家禽营养与饲料科技研讨会论文集[C];2007年
3 李向辉;;谈转基因植物的安全性[A];持续发展,再创辉煌——中国林学会林木遗传育种分会第五届年会文集[C];2002年
4 陶君彦;张晓昱;;转基因植物的安全性与应用展望[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年
5 姚建仁;邵向东;郑永权;;生物工程技术与农药工业[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
6 蔡伟明;;培育PgTIP1转基因植物的研究[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
7 杨莉;李琳洁;邓子牛;;柑橘无标记基因载体的构建及转化甜橙的研究(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
8 房经贵;刘艳红;杨光;章镇;陶建敏;;我国果树遗传转化研究现状的分析(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
9 肖荣凤;蔡鸿娇;刘波;;转基因植物及其生态安全[A];食品安全的理论与实践——福建省科协第四届学术年会“食品安全与农民增收”分会场暨福建省农学会第五届青年学术年会论文集[C];2004年
10 沈立明;;转基因水稻标记基因水平转移安全性评价和非预期效应研究[A];中国生态学会2006学术年会论文荟萃[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李少骞;转基因植物外源基因的检测方法及整合位点的研究[D];湖南农业大学;2002年
2 周莉娟;GFP在南方根结线虫(Meloidogyne incogita)拮抗菌Alcaligenes faecalis研究中的应用[D];福建农林大学;2005年
3 熊爱生;标记基因的克隆、化学合成和体外定向分子进化及其在果树基因工程中的应用研究[D];南京农业大学;2007年
4 杨晓红;BADH基因、反义4CL基因对二色胡枝子的遗传转化研究[D];北京林业大学;2009年
5 袁铁铮;木糖发酵酵母Scheffersomyces stipitis的转录本测序、磷酸化蛋白质组及基因关联性分析[D];中国农业科学院;2012年
6 朱化星;mRFP1报告基因表达及Gal4-UAS二元表达系统在小鼠中的应用[D];复旦大学;2005年
7 孙磊;利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花[D];北京林业大学;2009年
8 侯英杰;转基因杨树生态安全性评价初步研究[D];中国林业科学研究院;2008年
9 董江丽;利用转基因苜蓿生产轮状病毒可食用疫苗研究[D];中国农业大学;2005年
10 刘强远;两种精子膜蛋白的基因表达研究[D];中国协和医科大学;1990年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 崔丽巍;木糖筛选系统在黄瓜转化中的应用[D];东北师范大学;2010年
2 尚玉花;利用Cre/loxP系统删除转Bt基因水稻中的标记基因[D];安徽大学;2010年
3 田庆常;转基因植物中外源基因的高通量检测方法研究[D];浙江理工大学;2011年
4 毛俊娟;烟草叶绿体—核共转化载体的构建和转化烟草初步研究[D];四川大学;2007年
5 张楠;转基因植物安全筛选标记基因的克隆和NAMP/Bt融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建[D];新疆农业大学;2007年
6 邱淑萍;利用Cre/loxp系统定点删除转基因水稻胚乳中外源基因的初步研究[D];福建师范大学;2008年
7 崔雨;转基因植物的专利保护[D];华东政法大学;2011年
8 徐迅;转基因植物技术保障措施研究[D];华南理工大学;2012年
9 罗明云;用发光酶基因(LuxAB)标记法研究慢生型花生根瘤菌的竞争结瘤能力[D];四川农业大学;2001年
10 吴醒华;我国转基因植物专利保护的法律问题研究[D];重庆大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 南昌大学中德联合研究院 曹郁生教授;转基因食品和转基因饲料[N];中国畜牧报;2003年
2 记者 丁洪美;2010年全球转基因植物种植超亿公顷[N];中国绿色时报;2011年
3 记者 姜云飞阎红;杨胜利:转基因大豆是安全的 杨涣明:坚决支持转基因植物[N];大连日报;2008年
4 记者 程范淦;我省转基因植物试验设施建成开放[N];海南日报;2010年
5 黄世耀;也说转基因植物[N];福建科技报;2002年
6 周盈;转基因植物利弊互现[N];中国高新技术产业导报;2002年
7 记者 王心见;加找到防转基因植物扩散方法[N];科技日报;2003年
8 孟庆鹏 郭坚华;世界转基因植物研究的进展[N];农民日报;2002年
9 继成;转基因植物产“药”[N];医药经济报;2002年
10 湖北省种子管理站向子钧 伍同寸 吴和明;转基因植物品种存在哪些问题[N];湖北科技报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978