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射干中异黄酮类化合物的分离提取及体外活性研究

李森林  
【摘要】:脑卒中是一种严重威胁人类健康的重大疾病之一。天然抗脑卒中药物疗效确切、副作用小,越来越受到各类人群的重视。但是由于天然药物成分复杂且作用机理不明确,使得其研究的发展受到制约。因此对天然药物中化学成分进行分离分析及活性评价具有重要的意义。本论文以中药射干为研究对象,针对中药射干中异黄酮类化合物进行了系统的分析研究。首先优化了射干中异黄酮类化合物的传统有机溶剂和超声辅助离子液体提取的提取工艺。然后利用高效液相色谱与质谱联用(LC-MS)技术对提取物结构进行鉴定,再采用PC12细胞和超滤质谱(UF-LC-MS)活性筛选技术对射干提取物中抗脑卒中活性物质进行筛选,最后利用半制备型高效液相色谱(Semi-prep.HPLC)对活性单体进行分离,分离得到的单体采用高效液相色谱(HPLC)进行纯度的检测。采用离子液体-超声辅助提取法,从射干中提取、分离出4种结构相似的鸢尾黄素同系列物质。利用Semi-prep.HPLC一次性分离鉴定出7个单体化合物,其纯度均大于91%。通过PC12细胞和UF-MS活性筛选技术,从射干传统有机溶剂提取物中,筛选出了5种乳酸脱氢酶抑制剂。实验中将MPP~+处理的细胞与射干提取物混合培养时,细胞存活率较正常对照组相比显著提高,表明细胞损伤减少,细胞被保护,细胞存活率升高,实验结果证明射干提取物对MPP~+损伤的PC12细胞确实具有神经保护作用。在此基础上,运用UF-MS法,研究了射干提取物对乳酸脱氢酶的抑制作用。以高效液相色谱与电喷雾多级串联质谱(HPLC-ESI/MS~n)作为研究方法,对射干提取物中的活性化学成分进行了结构解析。采用UF-MS活性筛选技术,从射干超声辅助离子液体提取物中筛选出了4种α-葡萄糖苷酶抑制剂。选题在新药开发和治疗疾病方面具有较高的应用价值,对确保人类健康、促进提高人们的生活水平有着一定的意义。论文建立了射干中异黄酮类化合物传统有机溶剂和超声辅助离子液体提取方法,UF-MS和PC12细胞活性筛选法,HPLC和Semi-prep.HPLC分离纯化等分析测定方法,并利用此方法测定了得出了射干中5种乳酸脱氢酶抑制剂和4种α-葡萄糖苷酶抑制剂,为天然抗脑卒中药物的筛选提供了重要的理论基础。


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