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大连海域可培养海洋放线菌的分离筛选及鉴定

邵阳  
【摘要】:海泥中孕育着丰富的微生物资源,包括能产生各种次级代谢产物的海洋放线菌。本文采用9种分离培养基对大连海域13个不同采样地点的海泥样品进行放线菌分离,通过湿热处理及不处理2种方法,以制霉菌素和重铬酸钾为抑制剂,共分离到165株海洋放线菌。结果表明,在9种分离培养基中,LSE-SE-2为最有效的分离培养基,其次分别为燕麦培养基、M2培养基及HV-2培养基,而M13是分离到放线菌数目最少的培养基。两种处理方法分离到的放线菌数目基本相同,湿热处理后的海泥分离到85株海洋放线菌,未经任何处理的海泥分离到80株海洋放线菌。 对分离到的165株放线菌进行抗菌活性测定,结果表明有89株放线菌具有拮抗活性,占总分菌数的54%,其中对大肠杆菌具有活性的菌株26株,占总菌株数的16.4%,对金黄色葡萄球菌具有活性的菌株85株,占总菌株数的51.5%,对尖孢镰刀菌具有活性的菌株仅有6株,占总菌株数的3.6%。 对具有抗菌活性或形态独特的95株放线菌进行16S rDNA序列分析,结果表明,95株海洋放线菌可分为两大类,即链霉菌属和拟诺卡氏菌属。通过构建95株海洋放线菌的16S rDNA系统发育树,表明从大连海域海泥中分离到的海洋放线菌具有多样性,共分为37类链霉菌和4类拟诺卡氏菌;而通过构建对大肠杆菌具有拮抗活性的菌株的16S rDNA系统发育树,表明这些菌株分属于13类链霉菌和3类拟诺卡氏菌;同样的,通过系统发育分析,可以将对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性的菌株分为29类链霉菌和4类拟诺卡氏菌。 全部测序菌株与NCBI数据库进行比较,16株海洋放线菌的16S rDNA序列相似度低于99%,结合16株放线菌的形态特征、培养特征、生理生化特征,确定这16株放线菌分别为Streptomyces matensis(HA5)、Streptomyces albogriseolus(HC7)、Streptomyces globisporus(M8)、Streptomyces hawaiiensis(M76)、Streptomyces macrosporus(M77)、Nocardiopsis dassonvillei(MH28,PH26)、Streptomyces parvus(PH33)、Nocardiopsis terrae(HV3)、Streptomyces fimicarius(HW27)、Streptomyces pluricolorescens(HW66)、Streptomyces fradiae(HL9)、Nocardiopsis aegyptia(HE9)、Streptomyces rubiginosohelvolu(sHE16)、Streptomycescoelicoflavus(HE18)、Streptomyces cinereorectus(HE55)。其中菌株MH28和PH26最终鉴定为同一菌株,都是Nocardiopsis dassonvillei。


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