收藏本站
收藏 | 论文排版

耐冷假单胞菌Pseudomonas sp.G6产脂肪酶条件优化及其酶学性质研究

李楠  
【摘要】:脂肪酶是一类能将长链脂肪酸甘油酯催化水解为甘油和脂肪酸的甘油酯键水解酶。广泛用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。目前研究和应用的脂肪酶多为中温脂肪酶,酶的最适温度一般在40℃以上,在0℃左右没有酶活性。相比之下,低温脂肪酶在低温下仍然具有较高酶活性,其最适温度在30℃左右,在0℃左右有一定的催化活性。因此在食品脱脂、环境修复和洗涤添加剂等方面应用具有优势,近年来引起了广泛关注。 本文首先从实验室保存的耐冷菌中筛选脂肪酶的产生菌株,利用罗丹明B平板法筛选出产脂肪酶较好的4株菌命名为G6,H8,Z4和W7。对产脂肪酶活力最高的G6进行菌种鉴定。对其进行形态学和生理生化鉴定,结合部分16SrDNA序列分析,确定其为假单胞菌属,命名为耐冷假单胞菌Pseudomonas sp. G6。 为了提高菌株产酶能力,在摇瓶发酵水平上,对耐冷假单胞菌Pseudomonassp.G6产酶条件进行了研究。利用单因素实验研究不同碳源、氮源、无机盐对产酶的影响,确定产酶培养基的组成为葡萄糖5.0g·L~(-1),(NH_4)2SO_41.0g·L~(-1),蛋白胨10g·L~(-1),K2HPO41.0g·L~(-1),吐温8010mL·L~(-1),MgSO_42.0g·L~(-1),NaCl2.0g·L~(-1)。确定最佳的产酶培养条件为培养温度20℃;培养基的初始pH值7.5;接种量2%;装液量20%;摇床转速100rpm。在最佳的培养条件下,培养24h时产酶达到最大值为65.66U·mL~(-1)。 在单因素实验研究的基础上,采用响应面法优化产酶条件。得到耐冷假单胞菌Pseudomonas sp.G6最佳产酶条件为葡萄糖5.0g·L~(-1),蛋白胨12g·L~(-1),K2HPO41.0g·L~(-1),MgSO_42.0g·L~(-1),(NH_4)2SO_41.0g·L~(-1),NaCl1.2g·L~(-1),吐温8010mL·L~(-1),转速110rpm,装液量20%,接菌量2%,培养基pH7.5,培养温度20℃。最佳条件下产酶水平达到107.03U·mL~(-1)。 对耐冷假单胞菌Pseudomonas sp.G6所产的脂肪酶进行分离纯化研究。菌体发酵上清液经丙酮沉淀、透析浓缩、高速逆流色谱技术等步骤的处理,得到纯化的脂肪酶,SDS-PAGE检测其纯度为电泳纯,得到酶蛋白的分子量大约为65KDa。对纯化后的酶进行性质研究,结果表明:此酶的最适酶解温度为30℃,在5℃相对酶活30%;对热敏感,50℃以上处理30min后相对酶活仅残留不到20%;最适pH为7.5,pH在7-8范围内酶活相对比较稳定;金属离子Mn~(2+)对酶活力促进效果最佳,而Cu~(2+)、Hg~(2+)、Fe~(3+)、Zn~(2+)对酶活力有抑制作用;有机溶剂吐温80、EDTA、SDS和Tritonx~(-1)00对酶的活力均有抑制作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王琰;张志敏;王斌;陈斌;何玉婷;万一;马晓迅;;花椒籽油青睐型脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的研究[J];安徽农业科学;2011年21期
2 李鑫玲;孙晓菲;孟楠;卜美玲;刘进;;产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化[J];食品研究与开发;2011年06期
3 闻雅男;赵娜;滕雪莹;王学英;;黑曲霉植酸酶高产菌株产酶条件的筛选[J];辽宁农业科学;2011年03期
4 曾倩;王毓舒;孙鲲;俞勇;陈波;;一株分离自北极海冰的产β-半乳糖苷酶的海单胞菌(Marinomonas sp. BSi20414)的筛选、鉴定和产酶条件研究[J];极地研究;2011年02期
5 李晓宇;骆焱平;柳志强;邱波;;季也蒙毕赤酵母ypy17产脂肪酶条件的优化[J];湖北农业科学;2011年12期
6 魏涛;封盛雪;毛多斌;魏东芝;;根霉ZZ-3脂肪酶发酵条件的优化及酶学性质研究[J];食品工程;2011年02期
7 刘芳;曹新志;游见明;熊俐;覃邦钦;;甜酒曲华根霉淀粉酶菌株产酶条件的研究[J];中国酿造;2011年05期
8 徐华敏;贾建波;;脂肪酶产生菌的筛选及其理化特性研究[J];淮阴工学院学报;2011年03期
9 徐伟;石海英;;普鲁兰短梗霉产脂肪酶发酵条件的优化[J];食品与发酵工业;2011年05期
10 陈约慧;陈颖聪;刘冬冬;羊牡丹;陈梦丽;田际云;张洪勤;李东;应俊;;一株高产淀粉酶的解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及其产酶条件优化[J];中国微生态学杂志;2011年06期
11 王斌;宗浩;张志敏;王琰;万一;;耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究[J];安徽农业科学;2011年20期
12 李红宁;杨滟菊;;一株耐热脂肪酶产生菌XD-23的发酵条件优化[J];食品研究与开发;2011年07期
13 王文君;黄梅娜;夏延国;马敏;徐海峰;朱启忠;;产中性植酸酶菌株的筛选及产酶条件的优化[J];中国酿造;2011年07期
14 滕宏飞;王丹静;徐青;辛建美;罗红宇;;橄榄油乳化法测定脂肪酶活性的优化研究[J];食品工业;2011年06期
15 董丽辉;曾杰;范三微;凌庆枝;;亮菌固体发酵产漆酶条件的优化研究[J];现代农业科技;2011年15期
16 栗丛瑞;刘左军;李冰;刘守成;袁惠君;;产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的优化[J];中国食品工业;2010年12期
17 刘赛男;顾艳丽;张慧;李宪臻;;寡糖特异性麦芽糖酶产生菌的产酶条件优化[J];大连工业大学学报;2011年04期
18 王薇;张琇;包邑汶;王晓蕾;;果胶酶产生菌的分离及其产酶条件研究[J];安徽农业科学;2011年19期
19 张婕;赵敏;卢磊;李慧玲;;产β-甘露聚糖酶细菌的筛选及产酶条件的优化[J];北京林业大学学报;2011年04期
20 张瑶瑶;孙玉梅;曹方;杜巧娟;张晓锋;陈敏;;反应介质对脂肪酶活力及催化猪油水解和甲醇解的影响[J];中国酿造;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹秀华;祁建民;;红麻转化酒精糖化曲的构建及发酵酒精的工艺研究[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年
2 丁轲;余祖华;程相朝;闫文朝;赵战勤;王臣;张春杰;王天奇;;产纤维素酶芽胞杆菌产酶条件的研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
3 张铁鹰;吴兴群;董杰丽;刘强;;成年母猪后肠道产木聚糖酶厌氧菌的筛选、产酶条件与酶学性质的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 林英;秦萍;杜志强;张蓓蓓;;产纤维素酶绿色木霉F-UV264产酶条件优化[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
5 彭素萍;王一明;林先贵;朱泓;;产高温蛋白酶菌株BY25的产酶特性及酶学研究[A];第五次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2009年
6 张志东;茆军;唐琦勇;孙建;;碱性淀粉酶菌株的筛选及酶学特性的研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
7 杨新建;;芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的产酶条件及粗酶性质研究[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
8 李世俊;张清霞;徐敬友;纪兆林;童蕴慧;;产几丁质酶菌株L03的种类鉴定及其几丁质酶研究[A];江苏省植物病理学会第十一次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
9 崔艳红;张海棠;孟庆辉;王艳荣;;白腐真菌产木质素降解酶的条件及酶学性质研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
10 宋安东;王明道;杜风光;闫德冉;;平菇产木质素降解酶类研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭仁;耐有机溶剂脂肪酶的筛选、重组表达及其催化特性研究[D];华东理工大学;2010年
2 于珊珊;重组嗜热闪烁杆菌脂肪酶系的性质表征及嗜热磷酸三酯酶晶体结构解析[D];吉林大学;2010年
3 刘文山;脂肪酶在酿酒酵母中的表面展示研究[D];华中科技大学;2010年
4 杨光;脂肪酶固定化的新方法研究及其应用[D];浙江大学;2009年
5 苑博华;伯克霍尔德菌的筛选、鉴定及其发酵产低温脂肪酶的研究[D];江南大学;2010年
6 喻红芹;亚麻的品质及生物处理的研究[D];东华大学;2009年
7 高楠;褶皱假丝酵母脂肪酶热稳定性改造的设计与抗氧化酶的人工模拟[D];吉林大学;2011年
8 段杉;无花果沙雷氏菌壳聚糖酶的生化性质及产酶条件的研究[D];华南理工大学;2003年
9 盛军;海洋金黄色隐球酵母菊粉酶发酵生产、酶的分离纯化以及基因克隆的研究[D];中国海洋大学;2008年
10 何力;草鱼纤维素分解菌筛选、酶提纯及其相关活性研究[D];华中农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李楠;耐冷假单胞菌Pseudomonas sp.G6产脂肪酶条件优化及其酶学性质研究[D];黑龙江大学;2012年
2 周晶;一株脂肪酶产生菌的筛选鉴定、发酵条件优化及其酶学性质研究[D];中国计量学院;2012年
3 王迪;发酵性丝孢酵母脂肪酶与蛋白酶发酵及性质的比较[D];大连工业大学;2012年
4 张瑜;超高压对脂肪酶活性的影响及其机制初探[D];江南大学;2012年
5 邓颖颖;黑曲霉脂肪酶的摇瓶发酵、性质及其合成月桂酸单酯的研究[D];江南大学;2012年
6 董恒涛;粗状假丝酵母脂肪酶的分离纯化水解乳脂的研究[D];华南理工大学;2010年
7 李珍;产脂肪酶真菌的分离鉴定、产酶条件优化及酶学性质研究[D];四川农业大学;2011年
8 麻琼丽;产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件优化[D];海南大学;2010年
9 王金主;高产脂肪酶菌株的选育研究[D];济南大学;2011年
10 田野;假丝酵母99-125生产脂肪酶的发酵工艺研究[D];内蒙古农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978