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不同解磷菌配比解磷能力比较及解无机磷基因的克隆

秦平  
【摘要】: 磷素是植物生长的重要限制因子,单纯依靠大量施用磷肥来解决磷素缺乏已经出现资源浪费、环境污染等诸多弊端。解磷微生物在土壤中磷循环相关的生物学系统中担任着重要的角色,它可以将难溶磷素转化为可溶性磷,提高磷肥利用率,本论文围绕解磷微生物开展相关工作,取得以下结果: 本试验通过平板检测法、磷钼蓝比色法对黑龙江大学微生物重点实验室提供的九株解磷菌的解磷能力进行检测,以菌种和解磷能力为依据,选取五株解磷能力较强的菌株HDBP2、HDBP5、HDBP6、HDFP1和HDAP1,分别两两以1:1,1:2和2:1的体积进行配比,测定配比后培养液中可溶性磷含量并比较解磷能力。 试验表明,试验用所有解磷菌株都能在以Ca_3(PO_4)_2或卵磷脂为唯一磷源的平板中形成菌落,说明这九株菌都能分解Ca_3(PO_4)_2或卵磷脂供其自身生长发育。在无机磷平板上,HDBP5、HDBP6、HDFP1和HDAP1的菌落的四周均出现了较明显的透明圈;在有机磷平板上,HDBP5和HDAP1的菌落的四周出现了较明显的透明圈。液体培养时,以HDBP2:HDBP5=2:1时解无机磷能力最强,培养液中可溶性磷含量可达到90.25μg/mL。 目前对解磷细菌解无机磷基因的研究较少,公开发表的文章局限于细菌产酸途径中的调节基因。其中PQQ(吡咯喹啉醌)合成基因(pqqE)最具代表性,其编码产物可以促进细菌对无机磷的溶解利用。本试验根据GenBank上发表的蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的pqqE基因序列,利用primer premier 5软件设计引物,进行了HDBP1、HDBP2、HDBP4和HDBP5四株菌的pqqE基因的克隆。 通过对HDBP1和HDBP2进行细菌解无机磷基因的克隆得到了大小为494bp的pqqE基因片段,分别与GenBank中苏云金芽孢杆菌的pqqE基因序列比对,同源性分别达到93.52%和93.72%;通过对HDBP4和HDBP5进行细菌解无机磷基因的克隆得到了大小为494bp的pqqE基因片段,分别与蜡状芽孢杆菌的pqqE基因序列比对,同源性分别达到95.34%和95.55%。


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