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海藻多糖提取、纯化及其补体结合活性的研究

赵瑞希  
【摘要】:中国是海洋大国,“21世纪海上丝绸之路”的战略构想为促进我国从海洋大国向海洋强国的迈进制定了目标,因此发展海洋经济,提高海洋科研水平,海洋生物质资源化等都具有重要战略意义。本研究以海带加工产业中产生的废渣为原料,研究并评价海带渣生物质资源利用的可行性,期待能够将海带渣―变废为宝‖,既克服其带来的环境污染难题,又可以带来较高的经济效益。课题首先以海带渣为材料,进行了海藻多糖提取工艺的优化研究。采用均匀设计法进行方案设计,探讨了海藻多糖提取工艺中不同提取温度、提取p H、提取时间、提取次数以及不同料液比对多糖提取率的影响。通过建立不同优化模型,采用多种回归分析方式进行分析,确定了以多糖提取率为优化指标的海藻多糖提取工艺:提取温度123.7℃,提取p H为8.25,提取时间96.6min,提取三次,料液比为1:9.7。该模型预测海带渣多糖提取率的预测值为2.19%,验证实测值为2.44%,优化条件下获得的多糖提取率比优化前的多糖提取率提高约50%,并且显著高于同时设置的四组不同多糖提取方法。其次,本研究对均匀设计法提取的海带渣粗多糖进行了补体结合活性的测定,并根据不同多糖补体结合活性的ICH50值进行了方案优化。结果表明不同均匀设计提取方案所得海带渣粗多糖均具有良好的补体结合活性,ICH50值最低为5.6873μg/m L,最高为47.7665μg/m L。以补体结合活性为指标建立优化模型,多种回归分析模型预测和实际验证结果显示用有偏回归分析模型得出的优化模型提取多糖的补体结合活性得到了进一步提高,ICH50值达到3.6865μg/m L。采用柱层析法对提取的海带渣粗多糖进行分离纯化。首先对4种大孔树脂进行动态吸附筛选,确定大孔树脂D3520为后续实验所用树脂,海带渣粗多糖经D3520纯化后,实际回收率达到62.4%,色素去除率为65.0%,蛋白质脱除率为70.1%,多糖纯度提高了2.38倍。经离子交换树脂DEAE Sepharose CL-6B纯化后分为10个不同多糖级分,总多糖回收率为69.94%,且主要组分的纯度接近80%。选择分级组分HD-7和HD-8用Sephadex-G75进一步纯化结果显示该两个组分均被进一步分离为两个不同的多糖组分。综上所述,本研究确立了一套兼顾海带渣多糖提取率与补体结合活性的提取方法,并建立了一套海带渣粗多糖的分离纯化方法。本课题为海带渣资源化利用提供了新的思路和科学依据,为后期海带多糖生物活性的深入研究和应用提供有力的依据。


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1 赵瑞希;海藻多糖提取、纯化及其补体结合活性的研究[D];哈尔滨工业大学;2015年
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