收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

四株乳酸杆菌对溃疡性肠道炎症的调节作用研究

王碧莹  
【摘要】:乳酸杆菌属于肠道正常菌群,参与调节机体免疫应答,以维持肠道微生态的平衡。越来越多的研究发现,乳酸杆菌作为一种益生菌,具有多种免疫调节活性。体内和体外实验都证实乳酸杆菌能够调节肠炎。但是,目前关于乳酸杆菌对肠炎的调节作用同时进行体内和体外验证研究较少。因此本课题以脂多糖(LPS)作为炎性刺激物,研究从L.paracasei subsp.paracasei M5-L、L.casei Q8-L、L.rhamnosus J10-L和LGG对HT-29细胞炎性因子调节作用,并为动物实验筛选出对肠炎抑制效果更为显著的乳杆菌。随后进行动物实验验证,动物实验中以葡聚糖硫酸钠(DSS)作为炎性刺激物,建立溃疡性肠炎模型,研究乳杆菌对小鼠溃疡性肠道炎症的调节作用。体外实验首先对四株乳杆菌J10-L、Q8-L、M5-L和LGG进行计数,利用MTT实验确定后续实验条件为LPS作用浓度为5μg/m L,乳酸杆菌与细胞的感染复数为1:1,同时证实了选定的四株乳杆菌都能够抑制LPS对HT-29细胞增殖的影响,但是不同菌株在不同时间对细胞增殖的影响不同。通过NO试剂盒测定细胞上清液中NO,ELISA试剂盒测定细胞上清液中IL-8和TNF-α含量的检测,证明四株乳酸杆菌都能够明显抑制LPS刺激细胞过度分泌NO和TNF-α,并且这种抑制作用存在菌株差异性。但是对IL-8的下调作用并不显著。体外细胞实验结果表明乳杆菌J10-L对肠炎的调节作用效果不显著,并且四株菌株预防组效果相对于治疗组和竞争组效果更显著。根据体外细胞实验结果筛选出对肠道炎症因子抑制效果更显著的乳酸杆菌Q8-L、M5-L和LGG进行小鼠肠炎预防实验。体内小鼠实验通过预实验确定用2%DSS来诱导肠炎模型,并在诱导小鼠肠炎模型前用乳杆菌浓度为108 cfu/m L和109 cfu/m L的乳杆菌Q8-L、M5-L和LGG灌胃4周。养鼠期间每天测定小鼠的体重并根据体重减轻情况和血便情况对小鼠进行DAI评分,DAI评分表明三株乳杆菌能不同程度的减轻小鼠患病症状。随后通过小鼠脏器重量和结肠长度表明三株乳酸杆菌均能肠炎引起的脾重量增加和结肠变短变轻状况。对小鼠结肠进行HE染色后,观察组织切片并且进行组织学评分证实Q8-L、M5-L和LGG能不同程度的缓解肠炎带来的组织学损伤状况。通过MPO试剂盒测定小鼠结肠中的MPO,ELISA法测定小鼠血清中IL-8和TNF-α含量,发现乳酸杆菌Q8-L、M5-L和LGG都能下调DSS刺激的小鼠产生的MPO,IL-8和TNF-α含量,上调IL-10含量。用RT-PCR测定TLR4和TNF-α的基因表达量,在基因水平上说明三株乳酸杆菌能抑制DSS刺激小鼠分泌的TNF-α,并且TLR4受体在乳杆菌调节肠道炎症时起到关键作用。这些结果表明乳杆菌能够显著调节体内肠炎,并且调节作用存在菌株和浓度差异性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王颖;母乳中发现IL-10[J];生物技术通报;1995年06期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 王萍;葛亮;潘若浪;董伟仁;项黎新;邵建忠;;IL-16诱导肠道炎症及其分子机制[A];细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉论文摘要集[C];2013年
2 卿国忠;杨靖;周灵芝;钟警;;小剂量胰岛素对内毒素致伤大鼠肠道炎症的影响[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 李锋;婴幼儿粪钙卫蛋白水平变化及肠道炎症影响生长机制的初探[D];上海交通大学;2015年
2 吕超蓝;ACK1和Src与肠道炎症发生机制初探[D];南方医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 卜云璇;草鱼白细胞介素1β的克隆及其在肠道炎症中的功能鉴定[D];苏州大学;2015年
2 杨钊;非酒精性脂肪性肝病患者肠道菌群特点及肠道炎症研究[D];南方医科大学;2017年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 ;肠道疾病药物有新突破[N];科技日报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978