硒缺乏对雏鸡脾脏PI3K/AKT/mTOR信号转导通路的影响

【摘要】：硒是动物机体内生长发育所必需的一种微量元素。硒缺乏导致雏鸡等幼龄动物发病,使机体免疫功能下降。但硒缺乏导致雏鸡脾脏发育缓慢,淋巴细胞减少,抑制脾细胞增殖机理尚不明确。PI3K/AKT/mTOR信号转导通路是动物机体内重要的信号转导通路之一,主要对促进细胞增殖和抑制细胞凋亡等方面起着重要作用。本试验通过复制硒缺乏雏鸡模型,研究硒缺乏对雏鸡脾脏PI3K/AKT/mTOR信号转导通路的影响,为揭示硒缺乏对雏鸡免疫机能的影响提供了试验依据。选取一日龄的SPF健康三黄肉仔鸡120只,随机分为两组即对照组和试验组。试验组雏鸡饲喂硒缺乏饲料,对照组雏鸡饲喂全价配合饲料,试验期35天。分别于试验的第7d、21d、35d随机抽取雏鸡剖杀,无菌条件下取出脾脏。在硒缺乏雏鸡模型成功建立的基础上,检测雏鸡脾脏脏器指数的变化;应用HE染色检测脾脏形态结构和脾脏淋巴细胞数量的变化;应用Western blot方法检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、P70S6K和p-P70S6K蛋白水平的变化;应用免疫组化方法检测PI3K和mTOR蛋白水平的变化。试验结果:(1)试验组与对照组相比,在试验第21d时,试验组脾脏重量极显著降低(p0.01),在试验第35d时,试验组脾脏重量及脾脏脏器指数极显著降低(p0.01)。(2)试验组与对照组相比,在试验第21d时,试验组脾脏淋巴细胞数量显著降低(p0.05),在试验第35d时,试验组脾脏淋巴细胞数量极显著降低(p0.01)。在试验第7d时,试验组脾脏病理变化不明显,在试验第21d和35d时,试验组脾脏淋巴细胞减少,排列疏松,纤维组织增生。(3)Western blot结果显示:试验组与对照组相比,在试验第21d时,试验组PI3K、p-AKT、mTOR、p-P70S6K蛋白表达水平极显著降低(p0.01);在试验第35d时,试验组PI3K蛋白表达水平显著降低(p0.05),p-AKT、mTOR、p-P70S6K蛋白表达水平极显著降低(p0.01)。(4)免疫组化结果显示:试验组与对照组相比,在试验第21d时,mTOR蛋白阳性表达率极显著降低(p0.01);在试验第35d时,PI3K和mTOR蛋白阳性表达率极显著降低(p0.01)。综上所述,硒缺乏能够引起雏鸡脾脏脏器指数下降,脾脏淋巴细胞减少,进而导致雏鸡机体免疫功能降低。硒缺乏可通过降低雏鸡脾脏中PI3K/AKT/mTOR信号转导通路活性来抑制脾脏发育和脾脏淋巴细胞增殖。