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贝莱斯芽孢杆菌PZ-3(Bacillus velezensis PZ-3)分离、鉴定及其对植物病原真菌的抑菌效果

欧阳晓伦  
【摘要】:银杏果实中含有多种对于植物病害有抑制作用的微生物,可作为生防有益微生物资源的来源。为了从银杏果实中分离纯化出对多种植物病害真菌具有生防潜力的拮抗细菌,以银杏外种皮为样品,通过平板划线法分离拮抗细菌,利用平板对峙法测定细菌对植物病原真菌的抑菌效果,通过对产孢基础培养基碳氮源的筛选和正交试验提高其产孢率,通过盆栽抑菌试验验证细菌的防治效果。本研究分离得到1株具生防作用的细菌,革兰氏染色结果为阳性,经生理生化试验分析和通过16S r DNA测序分析初步确定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),命名为B.velezensis PZ-3。贝莱斯芽孢杆菌PZ-3对灰梨孢菌(Pyricularia oryzae)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、新月弯孢菌(Curvularia lunata)、串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)6种植物病原真菌均具有抑制作用,抑制率在60%-69%之间,其中对藤仓镰刀菌的拮抗作用较强,抑菌率为69.19±0.24%,对新月弯孢菌的拮抗作用较弱,抑菌率为60.47±0.09%。贝莱斯芽孢杆菌PZ-3以大豆蛋白胨为氮源时,活菌数最高为3.4×10~9CFU·m L~(-1),芽孢率最高为65.74%±0.87,贝莱斯芽孢杆菌PZ-3以甘露醇为碳源时,活菌数最高为5.0×10~9 CFU·m L~(-1),芽孢率最高为61.63±1.14%。以大豆蛋白胨和甘露醇分别替代产孢基础培养基的胰蛋白胨和葡萄糖,贝莱斯芽孢杆菌PZ-3贝莱斯芽孢杆菌PZ-3活菌数最高为5.2×10~9 CFU·m L~(-1),芽孢率最高为74.04±0.64%。在30℃,190 r·min~(-1),培养80 h,贝莱斯芽孢杆菌PZ-3活菌数最高为5.6×10~9 CFU·m L~(-1),芽孢率最高为83.58±0.24%。在玉米盆栽抑菌试验中,阴性对照组发病指数为77.78,试验组的防效为57.15%。贝莱斯芽孢杆菌PZ-3对于多种植物病原真菌具有较好的生防效果,可作为潜在的生防微生物资源。贝莱斯芽孢杆菌PZ-3最优产孢氮源为大豆蛋白胨,最优产孢碳源为甘露醇,最优产孢培养条件为30℃,转速190 r·min~(-1),培养时间80 h。在玉米盆栽试验证明,贝莱斯芽孢杆菌PZ-3对藤仓镰刀菌侵染玉米根部造成腐软、发育不良的根腐病害具有防治效果。


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