低分子肝素的抑菌抑癌及降血脂活性研究

【摘要】： 低分子肝素(low molecular weight heparin,LMWH)是由普通肝素(unfractionated heparin,UFH)通过酶解或化学降解法得到的相对分子质量为3～8 KDa,平均5 KDa左右的混合物。低分子肝素与普通肝素相对比具有皮下注射吸收好、半衰期长、生物利用度高、同质性好、抗凝作用强、降血脂作用效果明显、副反应少、不需实验室监测等优势。经过氯磺酸-吡啶法修饰的低分子肝素因引入硫酸基团称之为多硫酸化肝素(polysulafted heparin,PSH)相对分子质量为6～13 KDa,本研究以低分子肝素为实验材料,对其抑菌、抑癌以及降血脂活性进行测试分析。 ⑴低分子肝素的体外抑菌作用研究。采用琼脂扩散法和2倍稀释法测定,测试分析低分子肝素和多硫酸化肝素对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的的体外抑菌效果,结果表明:两种肝素类多糖对常见的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性均有抑菌作用;并对金黄色葡萄球菌的抑菌效果差异极显著,但对大肠杆菌的抑菌效果差异不显著;最小抑菌浓度实验结果表明两种肝素化合物对大肠杆菌的抑菌程度比金黄色葡萄球菌较强。药物敏感性判断试验证明低分子肝素和多硫酸化肝素为中度敏感药物,并对革兰氏阴性菌有较好的抑制作用。 ⑵低分子肝素对四种人癌细胞的体外增殖抑制作用。采用细胞传代培养法进行癌细胞培养,MTT法对细胞的吸光度值及生长抑制率进行测定;倒置显微镜观察细胞形态的改变;应用流式细胞仪测定细胞周期的改变和细胞凋亡的情况。结果表明低分子肝素对人胃癌细胞(SGC-7901)的增殖具有明显的抑制作用,G0/G1期细胞比例增加,G2/M期和S期细胞比例减少,但不能诱导胃癌细胞的凋亡;低分子肝素能降低肺癌细胞(A549)活性,在G1期比率显著增加,在S期比率明显降低,但不增加坏死细胞的比率;低分子肝素对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖具有抑制作用,并呈明显的剂量-效应依赖关系,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少;用MTT法测定低分子肝素对体外培养的肝癌细胞(HCCLM3)的生长抑制情况,结果显示,其抑制作用明显,并随浓度的升高而增强,细胞凋亡率达48.43%。 ⑶肝素类化合物的降血脂实验。采用高脂饲料配方喂饲诱导小鼠致高脂血症模型,并测定其血液指标。结果表明,与高脂血症小鼠模型组相比,不同剂量的肝素组的胆固醇含量都有不同程度的下降,中剂量低分子肝素组和高剂量低分子肝素组可以显著降低高脂血症小鼠的血胆固醇含量;高剂量低分子肝素可降低高脂血症小鼠血清胆固醇达64.6%;中、高剂量低分子肝素组MDA含量比模型组显著降低,说明低分子肝素具有增强机体抗氧化能力。 结论:低分子肝素与多硫酸化肝素均能抑制革兰氏阳性、阴性菌的生长,并且均为中型敏感药物;低分子肝素能抑制四种人癌细胞的在体外的增殖,可将细胞周期阻滞在G0/G1期,并可诱导细胞凋亡,但不能诱导人胃癌细胞的凋亡;中剂量低分子肝素组和高剂量低分子肝素组可以显著降低高脂血症小鼠的血清胆固醇含量和MDA含量。