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GC-MS研究不同泌乳期中国人乳脂肪酸组成

张振  
【摘要】:人乳脂质组学研究是对人乳中所有的脂质进行全面系统的分析。主要是通过改进人乳脂质样品提取、分离方法和发展新的分析鉴定技术,特别是注重人乳脂质样品制备技术与先进仪器设备如质谱仪的联合应用,实现脂质的快速、高通量的分析鉴定。目前有关人乳脂肪酸分析报道比较常见,而关于人乳脂肪酸组成的脂质组学研究报道还尚未发现。由于人乳脂质组成比较复杂,本研究主要是对人乳脂质脂肪酸组成进行研究,对全面了解人乳脂肪酸组成、为进一步的更加全面的研究中国人乳脂质组学提供重要数据参考。 本研究利用脂质组学的研究方法,以中国人初乳、过渡乳和成熟乳为研究对象,通过氯仿-甲醇辅助超声萃取,提取人乳中总脂质,将所得到的人乳脂质利用固相萃取法分离。通过改进和优化的脂肪酸衍生化方法,将分离出的脂质充分的衍生化,利用GC-MS对衍生化后的人乳样品进行脂肪酸的脂质组学研究,全面分析中国人初乳、过渡乳和成熟乳脂肪酸的组成及其含量的变化。 本课题主要研究工作和结论如下: (1)在三种提取方法的比较下,选择氯仿-甲醇法辅助超声波萃取,通过对超声输出功率和超声时间参数的优化。结果表明:在超声输出功率为150W时,超声提取10min,人乳脂质的提取率达到最高。 (2)对脂肪酸的衍生化方法进行改进,并对衍生化条件作了优化选择,得到最佳的衍生化参数反应时间为22min、反应温度为81.5℃、KOH-甲醇的添加量为2.3mL、三氟化硼-甲醇添加量为1mL。该条件下能够使人乳脂肪酸衍生化充分。 (3)对GC-MS方法学研究,在一定浓度范围内,对方法的线性关系、回收率及精密度做分析研究,结果发现在5~600μg/mL范围内,浓度与通过GC-MS形成的分子离子峰的响应值呈良好的线性关系,并且方法回收率和精密度良好。表明该方法适合脂肪酸的分析。 (4)利用GC-MS对中国人初乳、过渡乳和成熟乳脂肪酸组成进行脂质组学分析,通过扫描脂肪酸甲酯的特征离子和对照质谱数据库实现对人乳脂肪酸的全面分析,得到人乳脂肪酸组成和质谱图。发现利用优化后的方法能够更加全面的分析脂肪酸,表明GC-MS能够更加准确的进行人乳脂肪酸组成的脂质组学研究。


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