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猪卵泡颗粒细胞凋亡及几种影响因素的研究

刘忠华  
【摘要】: 哺乳动物卵巢中卵泡闭锁现象是非常普遍的,但对于卵泡闭锁的本质及机理问题一直未能得 以解决。近年来,随着细胞凋亡研究的进展,人们逐渐认识到卵泡闭锁实质就是卵泡细胞凋亡的 过程。为进一步探讨卵泡闭锁机理及卵泡颗粒细胞凋亡的影响因素,本实验以猪为实验动物研究 了如下内容:猪卵泡闭锁过程中颗粒细胞凋亡现象的检验手段;发情周期不同阶段猪卵泡颗粒细 胞凋亡规律;发情间期注射PMSG对猪卵泡发育及颗粒细胞凋亡的影响;性未成熟小母猪注射 PMSG后对卵泡闭锁及颗粒细胞凋亡的影响;PMSG对体外培养的卵泡和颗粒细胞的细胞凋亡 影响;IGF-I对体外培养卵泡及颗粒细胞的细胞凋亡影响。结果表明: 1.猪闭锁卵泡中存在严重的颗粒细胞凋亡现象。 2.细胞涂片H.E染色法判定颗粒细胞凋亡的比例与TUNEL法判定颗粒细胞凋亡比例呈显 著正相关。在本实验中,H.E染色法完全可以替代TUNEL原位标记法进行细胞凋亡的定量检测。 3.闭锁卵泡颗粒细胞凋亡比例采用H.E染色法和TUNEL法判定,分别为34%和39.2%, 健康卵泡则分别为3.6%和9%。 4.发情周期不同阶段卵巢中各类卵泡颗粒细胞凋亡比例显著不同:大卵泡的颗粒细胞凋亡 比例较低,且在发情周期各阶段波动较小;小卵泡的颗粒细胞凋亡比例较高,并且随发情周期的 进行有较大变化。 5.发情间期注射PMSG可以显著抑制小卵泡、中等卵泡的颗粒细胞凋亡,但注射72小时 后效果下降。 6.性未成熟仔母猪卵巢中各类卵泡颗粒细胞凋亡比例很高,接近闭锁卵泡的凋亡比例;注 射PMSG后则各类卵泡颗粒细胞凋亡比例显著下降,但高于性成熟母猪注射PMSG后的凋亡比 例,并且维持的时间也较短。 7.PMSG可以显著抑制体外培养的卵泡及颗粒细胞的细胞凋亡,并且具有明显的剂量效应, PMSG浓度为10IU/ml时效果最好。 8.IGF-I可以显著抑制体外培养的卵泡及颗粒细胞的细胞凋亡,并且同样具有剂量效应,IGF-I 浓度为50ng/ml时效果最好。


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