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分蘖洋葱病毒病原鉴定及脱毒苗培养·增殖技术的研究

徐启江  
【摘要】: 黑龙江省分蘖洋葱病毒病发生普遍,阿城、宾县、五常三个地区的发病率均为100%, 病情指数分别为62.13%、71.07%和49.87%。典型症状为黄化条纹花叶,叶片扭曲畸形、 叶尖干枯,植株矮缩,鳞茎退化变小,产量和品质大幅度下降。 人工接种发现,可被分蘖洋葱病毒系统感染的植物有洋葱、大葱、大蒜和蚕豆;局 部感染的有千日红、苋色藜。电镜观察表明,病体细胞中含有大量线状病毒粒体,其长 度范围在300~1450nm之间。通过叶片超薄切片,在叶肉细胞质中观察到大量的风轮状、 束状、涡轮状和环状内含体,叶绿体被破坏。体外抗性测定结果:致死温度为55~65℃, 稀释限点为10~(-4),体外保毒期为3d。酶联免疫测试和洋葱黄矮病毒抗血清、大蒜复合病 毒抗血清呈阳性反应。根据以上特征证明,黑龙江省分蘖洋葱病毒病为几种病毒复合侵 染,具体包括哪几种有待于进一步研究。 以阿城紫皮分蘖洋葱鳞茎0.15~0.3mm茎尖为外植体,以MS为基本培养基,添加蔗 糖3.0%,琼脂0.8%,pH值调至5.7~5.8。通过激素配比试验,筛选出最佳的培养基组成。 利用植物组织培养技术,获得了分蘖洋葱无毒试管苗,结果表明:最佳诱芽培养基为 MS+BA0.1mg/l+NAA0.4mg/l,诱导率为100%,平均每个茎尖外植体形成3.1个不定芽, 而且无愈伤组织的形成;最佳生根培养基为1/2MS+IBA1.5mg/l+NAA0.01mg/l+PP_(333)0.1 mg/l,利用此项组培技术,进行了不同外植体大小、鳞茎热处理对脱毒效果影响的研究, 结果表明,80℃高温处理10min,然后剥取0.3~0.5mm的茎尖进行培养,脱毒率为100%。 以阿城紫皮分蘖洋葱鳞茎茎尖为外植体材料,对分蘖洋葱愈伤组织的诱导、分化、 再生苗的生根和移栽进行了研究。结果表明:(1)在不同激素组合的培养基上分蘖洋葱的 茎尖均能产生愈伤组织,其中2,4-D2.0mg/l+KT0.5mg/L的MS培养基对愈伤组织的诱导 最有利,其出愈率为100%;(2)在愈伤组织的分化中,转接到添加NAA、BA的MS分 化培养基上,愈伤组织进一步膨大,出现绿色芽点,均形成大量的丛生芽,其中以NAA0.1 mg/l+BA0.4mg/l的MS分化培养基最佳,其分化率为88.33%。平均成苗数为10.2,技 术上达到了快速繁殖、规模生产的要求;(3)再生植株生根和壮苗的最佳激素组合为 1/2MS+PP_(333)0.1mg/l+NAA0.01mg/l+IBA1.5mg/l,生根率为100%,根系发达,叶色浓绿, 生长健壮。移栽后长势良好,对环境具有较强的适应性,移栽成活率达100%。 分蘖洋葱试管微鳞茎的诱导研究表明:离体条件下,温度和光周期对试管鳞茎的形 成起着决定性的作用,而且提高培养基的pH值、增加蔗糖浓度也有重要的调控作用。 细胞学观察表明:茎尖分生组织培养脱毒苗遗传稳定,染色体未发生变异,均为 2n=16;愈伤组织及其再生苗遗传稳定性差,愈伤组织染色体变异率为33.85%,其中单 倍体占9.23%,四倍体占15.39%,非整倍体占9.23%;愈伤组织再生苗染色体变异率为 24.62%,其中四倍体占16.93%,非整倍体占7.69%。未发现三倍体的存在。 通过以上研究,对分蘖洋葱建立了有效的茎尖培养脱毒苗的速繁体系。


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