猪抑肌素基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中表达的研究

【摘要】：肌肉生长抑制素又称GDF-8(Growth Differentiation Factor-8)，属TGF-β超家族，其主要功能是特异性的抑制骨骼肌细胞增殖与分化，是骨骼肌生长、发育的负调控因子。将该基因剔除后会使骨骼肌的重量增加2至3倍，双肌牛现象也是由于GDF-8的天然缺失所造成的。 为进一步研究myostatin基因的结构与功能的关系、进行该蛋白的基因工程研究以及探索免疫蛋白的研制，本研究以克隆在pGEM-3Z上的猪myostatin基因cDNA为研究对象，利用Oligo5.0软件设计出两对上、下游特异性引物，并分别引入EcoRI和BamHI两酶切位点。扩增出与表达载体相匹配的全长与半长MSTN基因cDNA序列，构建融合表达载体，进而将构建好的表达载体转化到大肠杆菌BL-21中表达出全长与半长蛋白，实现了具有二硫键基因在大肠杆菌中的正确表达。