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欧亚大陆H9N2亚型禽流感病毒分子演化的研究

李建伟  
【摘要】: 本论文对25株欧亚大陆的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株进行了全基因序列测定、分析和分子演化的研究。这些H9N2 AIV毒株分离自不同的时间、地域和宿主,时间跨度为1995年至2000年,地域范围从中国内地的东北、华北、华中、华南、华东、西南、西北到巴基斯坦、伊朗、沙特阿拉伯、韩国、爱尔兰、德国和南非,横跨欧亚大陆,分别来源于鸡、鸭、鹌鹑、鸵鸟、雉鸡等多种宿主。 首先将实验用毒株在SPF鸡胚中增殖,提取核酸,然后应用Oligo(4.0版本)和Gendoc(2.3版本)软件设计H9N2 AIV所有8个基因片段特异的PCR引物及序列测定引物,通过RT-PCR方法扩增所有毒株的各个基因片段,纯化后用特异引物进行测序反应,反应产物纯化后在ABI Prism 377 DNA序列分析仪上进行序列测定,然后应用WISCONSINSequence Analysis Package(GCG,10.2版本)、Phylogenetic Analysis Using Parsimony(PAUP,4.0版本)和Treeview(1.5版本)软件进行序列的数据编辑、序列翻译、进化树绘制和遗传演化分析。 本文对欧亚大陆的H9N2亚型AIV进行了分子遗传演化分析,绘制了各个基因的进化树,结果表明本文研究的所有毒株的8个基因基本都属于欧亚大陆禽分支,其中HA、PB1、PA、NP、M、NS基因分属于Y280-like、G1-like、Y439-like亚分支,NA基因分属于Y280-1ike、G1-like、Y439-like、Gg-like亚分支,PB2基因分属于Y280-like、G1-like、Y439-like、KOR-like亚分支。多数亚分支可以进一步分为若干个小分支。 本研究结果证明,H9N2亚型人体分离株属于G1-like亚分支的G1-HK小分支,该小分支毒株之间具有很高的同源性,因此该小分支AIV可能具有感染人的可能性,是具有引起人流感暴发潜能的病毒。目前在我国内地分离株中没有发现这种病毒,只有CK/SC/5/97、DK/NJ/2/97、CK/HN/62/00的个别基因来自G1-like亚分支;深圳分离株CK/SZ/9/97是典型的G9-like病毒,可能来源于香港特别行政区;其余所有内地分离株都属于Y280-like亚分支。进化分析表明,我国内地分离株皆由内地早期分离株进化而来,各个毒株之间关系非常密切,进化相对缓慢。 本研究结果还表明,巴基斯坦分离株CK/PA/4/99和CK/PA/5/99属于G1-like亚分 李建伟 欧亚大陆 HgNZ亚型禽流感病毒分子演化的研究 2002年 5月 支的GIPA小分支,香港Gllike病毒属子该亚分支的GIHK /h分支,这两个小分支病 毒之间具有较高的同源性,进化树显示,GI干A小分支的形成明显早于GlllK小分支, 说明香港G卜1认/病毒可8睐源于G卜邱小分支病毒;中东分离株J八R/门v99和 比/’S肌’532川9是G卜1止/和W39-hk/的杂交病毒:欧洲分离株皿儿E;’门3/*5。 CK;’GE/R35/98、PH/IE/PV18/97和南非病毒s/SAF;9508103。’95基本属于 Y439-11hi亚 分支,但m八E,/W用川7的帖基冈例外,属于卜目,队“;门3o5的儿基因位于A组 欧亚禽分支,独立于俐可亚分支之外;CK..KOR.9902999是典型的 KOR-like病毒。 总之,本研究系统阐明了目前欧亚大陆H9\2亚型Al\’的分子遗传演化状况;明确 了我国内地流行毒株的归属范畴,提出了Glllki病毒的可sbo源,为今后HgNZ亚型 AIV的防制与研究奠定了基础,也为人类防范HgNZ FI HSNI亚型AIV感染的研究提供理 论依据。


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