收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大豆组织培养体系优化与双价抗虫基因遗传转化的研究

王萍  
【摘要】: 以55个东北地区主栽和国外引入大豆基因型的未成熟子叶、真叶、子叶节和下胚轴为外植体,用高浓度的生长素诱导大豆体细胞胚胎发生与植株再生,对影响大豆体细胞胚胎发生的因子大豆基因型、外植体种类、生长素种类与浓度、低温预处理时间,以及与大豆体细胞胚胎发生率有关的性状的相关性进行了研究;诱导大豆次生胚产生,探讨了与胚性组织增殖、萌发和再生植株有关的因子,优化了大豆组织培养再生体系。 以大豆未成熟子叶和胚性组织为受体,用农杆菌和基因枪两种方法对大豆进行Bt基因和CpTI基因双价抗虫基因的遗传转化,经PCR和PCR—Southern分析证明双价抗虫基因被转入到大豆中,并对影响遗传转化的因子进行了研究,主要研究结果如下: 1.以未成熟子叶为外植体成功地诱导了54个大豆基因型体细胞胚胎发生,占被诱导基因型的98.18%。在黑龙江、吉林和辽宁三省主栽的大豆基因型中筛选出体细胞胚胎发生率在50%以上的基因型8个。大豆未成熟子叶是诱导体细胞胚胎发生最好的外植体,以高浓度的2,4-D诱导体细胞胚胎发生效果更好。在诱导大豆体细胞胚胎发生时基因型间存在较大的差异,体细胞胚胎发生率在0~85.83%之间。 2.建立了适合于东北地区大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生与植株再生的组织培养体系,培养基成份、生长素的种类和浓度、低温预处理时间等因子对大豆不同品种的体细胞胚胎发生率均有影响。MS培养基附加高浓度的2,4-D,加或不加有机物(脯氨酸和腺嘌吟),在接种前将大豆幼荚在4℃低温预处理3~4d,可提高大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生率。接种时大豆未成熟子叶以3~5mm为宜,并与大豆品种的生育期有关,早、中熟品种在大豆开花16~20 d取荚,晚熟品种在大豆开花20~24 d取荚可获得较高的体细胞胚胎发生率。 3.构建了以大豆未成熟子叶为外植体诱导生产上大面积栽培的大豆品种产生次生胚,在固体培养基上增殖胚性组织,并再生结实植株的组织培养新体系,研究中发现胚性组织的增殖与2,4-D浓度和光照条件有关。 4.深入、系统地研究了抗生素对大豆品种生长发育的抑制作用。卡那霉素作为抗性选择标记所需浓度因不同大豆品种、不同外植体(真叶、子叶节、下胚轴、未成熟子叶和胚性组织)、外植体不同发育阶段(体细胞胚胎发生、胚萌发和再生植株)而各异,变化范围为25~100mg/L。不同根癌农杆菌菌株在侵染大豆不同外植体后所需脱菌剂的种类和浓度亦不同,LBA4404的最佳脱菌剂为头孢霉素,浓度依外植体的不同为200~500mg/L。 5.用农杆菌介导法对生产主栽大豆品种吉林35、吉林43和合丰35未成熟子叶进行了遗传转化,诱导体细胞胚胎发生和植株再生,移栽成活15株,12株PCR检测呈阳性反应,用地高辛标记Bt基因探针进行PCR-Southern分析,12株均呈阳性,证明Bt基因已整合到大豆基因组中,转化率依大豆品种、农杆菌菌液浓度、侵染时间和共培养时间不同变化在0~2.00%之间,平均转化率为0.56%。农杆菌介导的大豆遗传转化率主要 博士学位论文 大豆组织培养体系优化与双价抗虫基因遗传转化的研究 东北农业大学 受大豆基因型、共培养时间的影响,吉林43易于农杆菌介导的遗传转化,共培养时间以 1~2 d为宜。胚性组织农杆菌介导的遗传转化得到了 GUS基因的稳定表达,经PCR检测 证明,首次将BZ和巾TI双价抗虫基因转入大豆细胞中。 6.基回枪轰击大豆未成熟子叶和胚性组织得到了GUS基因的表达,发现轰击后适当 地延长大豆未成熟子叶在后高渗培养基中停留时间可提高基因枪转化效率。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 袁进成;刘颖慧;;谷子的组织培养和遗传转化研究进展[J];安徽农业科学;2009年23期
2 张祖荣;廖志华;;红景天苷的生物合成途径及生物技术研究进展[J];中草药;2010年09期
3 齐广勋;王金刚;杨向东;郭东全;薛健;张原宇;李启云;董英山;;白三叶基因工程改良研究进展[J];中国农学通报;2011年11期
4 贺杰;孙振元;魏建华;王宏芝;校现周;李瑞芬;;结缕草生物技术研究进展[J];武汉植物学研究;2006年01期
5 侯丽霞;何启伟;卜丽霞;焦自高;董玉梅;王崇启;;甜瓜组织培养及遗传转化研究进展[J];中国瓜菜;2007年04期
6 孔维萍;程鸿;苏永全;刘东顺;;西甜瓜组织培养与遗传转化影响因子研究进展[J];长江蔬菜;2010年12期
7 刘慧春;潘晓韵;朱开元;王炜勇;;观赏凤梨生物技术研究进展(综述)[J];亚热带植物科学;2007年04期
8 庞晓虹;陈磊;刘宏宇;;甜瓜基因工程研究进展[J];北方园艺;2008年12期
9 李霞;易干军;万勇;胡标林;谢建坤;;菠萝组织培养与遗传转化研究进展[J];江西农业学报;2010年08期
10 侯雷平;李梅兰;;蓝猪耳研究进展[J];山西农业科学;2008年05期
11 白婧;屈淑平;崔崇士;;瓜类蔬菜组织培养与遗传转化研究进展[J];中国瓜菜;2008年04期
12 汪波;彭定祥;;苎麻组织培养及遗传转化研究进展[J];中国麻业科学;2007年01期
13 武术杰;李邱华;;矮牵牛Tidal Wave品种遗传转化受体再生体系的建立[J];东北林业大学学报;2007年04期
14 杨宁,杨红,杨颖丽,王宏康,范小宁,杨建美,张永军;核果类果树组织培养及遗传转化的研究进展[J];西北师范大学学报(自然科学版);2005年01期
15 单兰兰,毛碧增,夏波,赖齐贤;草坪草组织培养和遗传转化研究进展[J];热带农业科学;2005年04期
16 秦永华,张上隆,朱道圩;猕猴桃的组织培养和遗传转化研究进展[J];细胞生物学杂志;2004年01期
17 徐洪国;高庆玉;祁宏英;;黑穗醋栗组织培养和遗传转化[J];果树学报;2009年02期
18 吴延军,徐昌杰,张上隆;桃组织培养和遗传转化研究现状及展望[J];果树学报;2002年02期
19 李雪;韩烈保;刘君;;多年生黑麦草转基因育种及其安全性的研究进展[J];中国草地学报;2008年04期
20 何勇,田志宏;草坪植物遗传转化的研究进展[J];生物技术通讯;2003年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 沈晓岚;王炜勇;俞信英;;观赏凤梨国内外研究进展[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
2 张上隆;;桃组织培养及遗传转化研究现状及展望[A];张上隆果树学文选[C];2006年
3 王姝杰;张成武;闫淑珍;李世访;;苜蓿组织培养及遗传转化的研究进展[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
4 钱雪艳;郭东全;杨向东;赵桂兰;;大豆体细胞胚性愈伤悬浮培养体系的建立及超声介导遗传转化的研究[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
5 潘才博;王家福;赖钟雄;;根癌农杆菌介导蝴蝶兰遗传转化的初步研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
6 杜晓艳;韩素英;梁国鲁;齐力旺;;青杨组培再生系统的建立[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
7 黄大昉;张杰;张中鸽;;棉花枯萎病菌的原生质体制备与遗传转化(英文)[A];“植物病虫害生物学研究进展”——植物病虫害生物学国家重点实验室研究论文选[C];1995年
8 王萍;王罡;季静;;马铃薯不同外植体的组织培养[A];2006年中国作物学会马铃薯专业委员会年会暨学术研讨会论文集[C];2006年
9 贾利敏;贾利欣;;玉米组织培养和植株再生的研究现状[A];2003年内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2003年
10 关宁;李聪;;γ-zein基因改良紫花苜蓿品质的研究初报[A];中国草学会牧草育种专业委员会2007年学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王萍;大豆组织培养体系优化与双价抗虫基因遗传转化的研究[D];东北农业大学;2002年
2 武丽敏;小麦遗传转化参数优化及其应用研究[D];四川农业大学;2005年
3 张彦妮;复叶槭组织培养再生体系建立及其遗传转化初步研究[D];东北林业大学;2005年
4 张明洲;农杆菌介导高梁转化体系的建立与Bt(Bacillus thuringiensis)抗虫基因的导入[D];浙江大学;2002年
5 李杰;渗透胁迫信号传导关键基因的克隆及DREB1A基因对水稻的遗传转化[D];东北农业大学;2003年
6 Abdul Razzaq;[D];河北农业大学;2005年
7 杨怀义;草莓果实膜联蛋白基因的cDNA克隆及其遗传转化的研究[D];沈阳农业大学;1999年
8 梁机;转rolB基因改良毛白杨生根能力的研究[D];北京林业大学;2004年
9 王慧梅;喜树组织培养与遗传转化的研究[D];东北林业大学;2004年
10 詹亚光;白桦的组织培养和遗传转化研究[D];东北林业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 覃伟;优质籼稻组织培养及农杆菌介导遗传转化体系建立的研究[D];广西大学;2005年
2 张广求;Ri质粒介导紫锥菊的遗传转化及其毛状根中次生代谢产物的含量分析[D];重庆大学;2005年
3 王海朋;桑树转景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)的研究[D];山东农业大学;2011年
4 张静;杨树再生体系的建立及Bar基因转化的研究[D];安徽农业大学;2005年
5 贾永芳;半夏离体培养研究及遗传转化的初探[D];西南农业大学;2003年
6 王辉;香榧的组织培养及快繁技术的研究[D];浙江大学;2006年
7 邹湘辉;根癌农杆菌介导的花生遗传转化的研究[D];汕头大学;2004年
8 萨如拉;用基因工程方法获得低木质素转基因紫花苜蓿的研究[D];内蒙古农业大学;2006年
9 包爱科;AVP1基因转化紫花苜蓿的初步研究[D];兰州大学;2006年
10 蒿燕;利用人工microRNA技术构建CHSJ基因沉默载体及适于矮牵牛转化株系的筛选[D];西南大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王新华;俄罗斯用“组织培养”法育出更耐涝小麦[N];粮油市场报;2010年
2 ;一种应用聚丙烯薄膜装作组织培养包装容器的组织培养方法[N];中国包装报;2004年
3 罗兵前;现代生物繁殖技术——组织培养[N];江苏农业科技报;2000年
4 辛 夷;组织培养在中草药GAP生产中的应用[N];中国中医药报;2002年
5 江苏 何小弟;日本小叶常春藤组织培养[N];中国花卉报;2005年
6 吴杰;搞好传帮带 留下好作风[N];人民武警;2006年
7 姜小舟;中国兰花的组织培养[N];中国花卉报;2004年
8 上海鼎汉生物科技有限公司 苏俊明 张友强;蝴蝶兰病毒病发生与防治(四)[N];中国花卉报;2008年
9 荆州支队 易家昊;牢记“三个珍惜”[N];人民武警报;2011年
10 袁晓凡;寻找培育雪莲之道 为西部发展添助力[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978