美洲拟鲽抗冻蛋白基因植物表达载体的构建

【摘要】： 在生物体内已经发现了多种类型的抗冻蛋白，例如：鱼类抗冻蛋白、植物抗冻蛋白和昆虫抗冻蛋白。其中研究比较清楚的是鱼类的抗冻蛋白，对植物和昆虫抗冻蛋白的研究也正在开展。抗冻蛋白有很多重要的应用，它可以改进农作物的产量和质量，增强幼苗的存活力，延长作物的生长季节和栽种范围，还可以降低作物的贮存温度，增加贮存的时间。此外，抗冻蛋白在医学、食品科学、工业上也都有重要的应用。 本实验中人工合成了美洲拟鲽抗冻蛋白基因，并在美洲拟鲽抗冻蛋白基因两侧添加了许多调控序列，如具有加倍增强子的35S启动子和nos终止子，它们可以促进抗冻蛋白基因的转录，及可在翻译水平上提高基因表达的Ω序列和Kozak序列，从而构建了抗冻蛋白基因的高效表达盒。将此表达盒连接到pBI121.1上，最终获得了抗冻蛋白基因植物高效表达载体pBRTSAFP。用基因枪法将之导入玉米的愈伤组织中，并检测了与抗冻蛋白基因连在一起的gus基因的表达情况。检测结果表明：gus基因瞬间表达十分强烈。