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美洲拟鲽抗冻蛋白基因植物表达载体的构建

李树峰  
【摘要】: 在生物体内已经发现了多种类型的抗冻蛋白,例如:鱼类抗冻蛋白、植物抗冻蛋白和昆虫抗冻蛋白。其中研究比较清楚的是鱼类的抗冻蛋白,对植物和昆虫抗冻蛋白的研究也正在开展。抗冻蛋白有很多重要的应用,它可以改进农作物的产量和质量,增强幼苗的存活力,延长作物的生长季节和栽种范围,还可以降低作物的贮存温度,增加贮存的时间。此外,抗冻蛋白在医学、食品科学、工业上也都有重要的应用。 本实验中人工合成了美洲拟鲽抗冻蛋白基因,并在美洲拟鲽抗冻蛋白基因两侧添加了许多调控序列,如具有加倍增强子的35S启动子和nos终止子,它们可以促进抗冻蛋白基因的转录,及可在翻译水平上提高基因表达的Ω序列和Kozak序列,从而构建了抗冻蛋白基因的高效表达盒。将此表达盒连接到pBI121.1上,最终获得了抗冻蛋白基因植物高效表达载体pBRTSAFP。用基因枪法将之导入玉米的愈伤组织中,并检测了与抗冻蛋白基因连在一起的gus基因的表达情况。检测结果表明:gus基因瞬间表达十分强烈。


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