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抗禽流感病毒中药及盐酸金刚烷胺诱导M2基因变异的研究

李艳华  
【摘要】: 禽流感(Avian Influenza,AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的疾病,被国际兽医局定为Ⅰ类烈性传染病,对养禽业的危害极大,高致命力禽流感病毒造成的死亡率高达100%。1997年,在香港有18人感染H5N1亚型的禽流感病毒,两人感染H9N2亚型的禽流感病毒。这说明禽流感病毒可以突破种间屏障而感染人,更突出了其公共卫生的重要性。由于禽流感病毒变异快,亚型多,使禽流感的防治面临严峻的挑战。因此,探讨禽流感的防治方法显得尤为迫切。 盐酸金刚烷胺在医学上主要治疗流感,但是流感病毒对盐酸金刚烷胺极易产生耐药性,降低治疗效果。本试验通过用RT-PCR方法对5株不同亚型的禽流感病毒M2基因进行分析,预测其跨膜域二级结构,从而推测其功能的改变。此外,5株不同亚型禽流感病毒与5μg/ml的盐酸金刚烷胺共同作用,连续传5代,跨膜域氨基酸突变位点在37位、31位、34位,通过对二级结构预测,发现其跨膜域二级结构发生改变,从而推测功能改变。 中草药是中华民族的历史遗产,不仅药源丰富,而且毒副作用小。中药作用是多靶点的,不易产生耐药性。本文通过对贯众、板蓝根、黄连、柴胡、连翘、银翘散、荆防败毒散、柴葛解肌汤等单、复方中药在鸡胚上及犬肾细胞上对禽流感病毒进行试验,筛选出抑制禽流感病毒效果好的贯众、板蓝根等,按照中兽医医药理论的组方原则将筛选得到的中药制成复方制剂Ⅱ。复方中药Ⅱ不仅对禽流感病毒有直接灭活作用,而且对吸附于细胞表面和进入细胞内的禽流感病毒都有抑制作用,从细胞水平研究中草药抗禽流感病毒的作用机理。 该研究通过FAC检测SPF鸡在服用复方中药Ⅱ后,探讨外周血液中CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+及TCR_1~+各类T淋巴细胞百分比含量的变化及IgG的变化,初步探索复方中药Ⅱ对禽流感病毒作用的免疫机理。结果表明:与对照组相比,CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+及TCR_1~+各类T淋巴细胞百分含量变化有增高的趋势;此外,IgG也有增高的趋势。 通过复方中药Ⅱ的临床防治效果证明:它能起到较好的预防作用,能延长鸡的平均死亡时间。 通过口服和腹腔注射两种途径研究复方中药Ⅱ对昆明小鼠的急性毒性。口服复方中药Ⅱ后,对昆明小鼠无毒;腹腔注射复方中药Ⅱ后对昆明小鼠的半数致死量(LD_(50))为425.6mg/kg。 采用腹腔注射的途径,利用药物累积法研究复方中药Ⅱ在昆明小鼠体内的动态变化,计算该复方中草药的表观药动学参数。表观分布容积(v)值为10.039或23.01,ka值为4.9078/h或6.4089/h,kel为0.1501或0.19634,表示药物在体内消除速度慢,药物浓度下降也慢,药物在体内存留时间长,药效也长。


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