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山羊体外受精和显微受精及相关问题的研究

周佳勃  
【摘要】: 山羊作为一种经济动物,具有生长速度快,适应能力强、分布范围广等特点。但是,我国现有的山羊品种生产性能相对较低。为增加山羊养殖的效益,进一步推动我国山羊良种化的进程,需要用人工输精、体外受精和胚胎移植等技术来加快山羊育种进程。本实验使用屠宰场获得的山羊卵巢卵母细胞体外成熟后的进行体外受精和显微受精,研究体外受精和显微受精中的影响因素和相关问题,达到为生产和山羊胚胎发育研究提供大量优质廉价的胚胎的目的。还对山羊精液液态保存的机理、稀释液配方和保存的程序进行了研究。 结果表明: 1、山羊精子在mDM液中38.5℃、肝素浓度为50μg/ml、获能45分钟获能效果最好。在获能过程中单层输卵管上皮细胞有助于提高获能和体外受精效果。 2、体外受精中不同公羊之间在受精率和桑椹胚/囊胚率上都有显著差异。 3、附睾尾和鲜精的受精能力没有显著差异。山羊精子只有经过附睾以后才获得受精能力。 4、扩展良好的山羊卵巢卵母细胞的受精率和胚胎发育能力显著高于卵丘扩展差的卵母细胞。受精前去掉山羊卵丘或者去掉部分卵丘对受精率没有显著影响,但是受精前完全去掉卵丘对于胚胎的后续发育有明显影响。 5、山羊附睾不同部位精子通过ICSI技术都可以正常受精并能支持早期胚胎发育,但在带下注射时附睾头和附睾体的精子受精和胚胎发育均显著低于附睾尾精子。 6、山羊死亡精子通过ICSI技术可以受精并发育,但是随死亡时间延长受精和发育能力下降。 7、低浓度的(0.0005%)TritonX—100处理的精子有助于提高ICSI的受精率和发育率。 8、A23187和Inomycin/6-DMAP都能显著提高ICSI注射后卵母细胞的受精率、卵裂率和桑椹胚/囊胚发育率,而且在山羊Inomycin/6-DMAP的激活作用效果与A23187的激活作用效果没有显著差异。 9、用0.3M的蔗糖处理是一种优选山羊MⅡ期卵母细胞的有效方法。 10、在15℃山羊精液液态保存稀释液保存效果顺序:ANDROHEP>H-M199>ZORLESCO>mTyrode>BTS>M2>mDPBS>Tris-柠檬酸钠液。山羊精液液态保存稀释后的降温速度为3—24min/℃效果较好。不同温度下的山羊精液液态保存效果依次为5℃>15℃>20℃>25℃>38.5℃。在5℃山羊精液稀释倍数5—10倍液态保存的效果最好。山羊精液液态保存稀释液添加卵黄有助于保存,但是必须排除精浆的副作用。


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