收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

山羊卵泡刺激素基因的克隆、序列分析及表达载体构建

张莉  
【摘要】: 当前畜牧业生产中所使用的卵泡刺激素(FSH)产品都是从牛、羊、猪等家畜的脑垂体中直接提取的,由于材料来源有限、纯度差且常有其它激素的污染,影响了FSH的广泛应用。用基因工程方法可大量生产高纯度的FSH,降低生产费用,这对畜牧业生产具有重要意义。 本试验是从新屠宰的母山羊脑垂体中提取总RNA,反转录获得cDNA,以此cDNA为模板,PCR扩增目的基因片段,分别获得长为360bp的山羊FSH-α亚基DNA片段和长为390bp的山羊FSH-β亚基DNA片段,与预期的目的基因片段大小一致。将它们分别克隆至pMD 18-T,随机挑选几个阳性重组子进行测序。将测序结果与绵羊等多种哺乳动物该基因及相应的氨基酸进行同源性比较、分析。结果显示山羊FSH-α、β亚基基因及其各自对应的氨基酸与其他哺乳动物的同源性都非常高,一般均在80%以上,验证了在同一种内,甚至在所有的哺乳动物中FSH-α亚基是极为保守的;而FSH-β亚基尽管具有种属特异性,但也是相当保守的。将所得的山羊FSH-α、β亚基基因分别用加相应限制性内切酶酶切位点的引物大量扩增,回收后与pMD 18-T连接,筛选出阳性重组子,大量双酶切回收获得带粘性末端的山羊FSH-α、β亚基基因,将它们分别与同两个酶大量双酶切回收获得的带粘性末端的PF质粒进行连接,筛选阳性重组子。依此方法分别构建了FSH单亚基真核表达载体gFSH-α-PF、gFSH-β-PF和FSH双亚基真核表达载体gFSH-α-β-PF、dFSH-α-gFSHβ-PF。 本研究首次进行了山羊FSH的基因克隆、序列分析及表达载体构建方面的探索,填补了国内外重组山羊FSH基础研究的空白,为今后重组山羊FSH的大量生产应用提供了理论基础和实验依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 肖逸群;杨万年;;编码拟南芥含BAG结构域蛋白的原核表达载体构建[J];华中师范大学学报(自然科学版);2007年01期
2 杨春华;邱昌庆;曹小安;;流产布鲁氏菌omp25基因毕赤酵母表达载体的构建和鉴定[J];中国人兽共患病学报;2007年07期
3 张清霞;黄姗姗;童蕴慧;徐敬友;;地衣芽孢杆菌W10 β-甘露聚糖酶基因的克隆与表达[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2010年04期
4 王小兰;周宇;彭慧峰;刘顺枝;田长恩;;At3g13600截短型蛋白的原核表达载体的构建[J];广州大学学报(自然科学版);2011年03期
5 胡建国,富赛里,李莹,徐晓明,陆佩华;GAP-43干扰RNA表达载体的构建与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年06期
6 周灵德;闫玉华;袁琳;李世普;;大鼠骨粘连蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化[J];武汉理工大学学报;2008年05期
7 何军;余冰;张克英;陈代文;;里氏木霉木聚糖酶基因(XynⅡ)在毕赤酵母中异源表达及重组蛋白酶学性质分析[J];农业生物技术学报;2009年05期
8 王静澄;李昊;崔东清;刘军梅;叶梅霞;张志毅;安新民;;毛白杨PtSEP3-1基因启动子的克隆分析及其表达载体构建[J];基因组学与应用生物学;2010年02期
9 王峰;黄璐圆;;小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化[J];华南农业大学学报;2010年03期
10 杨学习;谢美娟;李欣;李粉霞;徐伟文;李明;;人酪氨酸激酶6原核表达载体的构建、表达、纯化与鉴定[J];免疫学杂志;2011年02期
11 崔道珊;宋兰芝;许永瑞;李殿君;;噬菌体T7溶菌酶工程菌的构建[J];生物工程学报;1991年04期
12 郑艳;刘长江;管艺飞;;dhaT基因克隆及其与gldABC基因串联表达载体的构建[J];食品与发酵工业;2006年09期
13 吕永智;黎波;;人Troponin I的表达载体构建诱导表达和纯化及活性测定[J];西南农业大学学报(自然科学版);2006年05期
14 陈涛;刘红涛;吕鹏举;薛乐勋;;杜氏盐藻异养表达载体的构建及异养转化株的鉴定[J];生物工程学报;2009年03期
15 闵凯;宋瑞清;邓勋;;毛栓菌漆酶基因克隆及其酵母表达载体的构建[J];安徽农业科学;2009年27期
16 王金固;杜娟;李尚伟;;杂合抗菌肽基因的设计及表达载体的构建[J];贵州农业科学;2011年05期
17 朱新霞,田丽萍,高剑峰,祝建波;小拟南芥chitinase基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达[J];植物研究;2005年04期
18 李征;毕跃东;曾献武;刘知微;;重组人活性蛋白C的基因克隆、表达载体构建以及在哺乳动物细胞中的高效表达[J];食品与药品;2006年06期
19 郭焱;路英丽;邹冬辉;赵慧;王忠山;;人卵透明带重组融合基因及其表达载体的构建[J];中国现代医学杂志;2006年15期
20 范妙华;李纪元;范正琪;田敏;倪穗;;千年桐SAD基因克隆与分析及其丝状真菌表达载体构建[J];西北植物学报;2008年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周红梅;徐宁迎;郭晓令;;C.elegans fat-1基因克隆及其家兔表达载体构建[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
2 路新梅;石德顺;李湘萍;;水牛脂多糖结合蛋白表达载体构建及其稳定表达细胞系的建立[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
3 李多兰;张伟杰;钱鹏旭;曹卫;;hNIS表达载体构建及在乳腺癌细胞中功能研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
4 钱炳俊;李光地;汪垣;周志刚;张大兵;;含新型乙型肝炎抗原基因SS1的马铃薯表达载体构建及其表达[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
5 李大可;尤志学;彭芝兰;;HPV16E6基因特异性RNA干扰表达载体的构建及对HPV16E6基因抑制作用的研究[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
6 刘艳红;章镇;陶建敏;蔡斌华;杨丽娜;周蓓蓓;王宏福;;蘡薁PGIP基因的克隆、序列分析及表达载体构建[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
7 陈甜甜;刘建柱;周栋;刘海涛;成子强;郭慧君;王振勇;张利;柴同杰;;猪附红细胞体MSG1部分基因片段的全基因合成及克隆表达[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
8 李征;毕跃东;刘知微;曾献武;;重组人活性蛋白C的基因克隆、表达载体构建、以及在哺乳动物细胞中的高效表达[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
9 郝凤奇;王春凤;;食品级乳酸菌高效表达载体系统的研究进展[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
10 于鑫;丘德峰;王翀;;猪miR24的克隆及表达载体的构建[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 严红;植物人工微RNA(amiRNA)表达载体构建的方法学研究及其应用[D];华中农业大学;2010年
2 关宁;含硫氨基酸基因对烟草、百脉根的遗传转化及表达定位的研究[D];中国农业科学院;2009年
3 邵敬伟;肺炎克氏杆菌甘油脱水酶基因克隆、序列分析及表达载体构建研究[D];沈阳农业大学;2004年
4 贾香楠;转基因毛白杨生理生化特性及多基因表达载体构建[D];北京林业大学;2010年
5 薛淑群;锦鲤疱疹病毒(KHV-hIj)株的分离与表达载体构建[D];东北林业大学;2012年
6 张杰;高效灭蝗基因工程菌的构建[D];四川大学;2004年
7 郑青;新型抗菌肽基因的设计、合成与表达研究[D];华南理工大学;1997年
8 郭强;shRNA表达库构建方法研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
9 余方;KCNQ2钾通道的温度调控机制研究[D];武汉大学;2011年
10 许雷;大麦黄矮病毒GPV株系ORF5基因的克隆、表达载体构建及转基因研究[D];中国农业科学院;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 毛志福;Fat-1表达载体构建及转Fat-1基因萨福克羊成纤维细胞系的建立研究[D];石河子大学;2013年
2 孙琦;水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化[D];甘肃农业大学;2010年
3 王海亮;坚强芽孢杆菌和短小芽孢杆菌表达载体构建的分析[D];中国海洋大学;2013年
4 张莉;山羊卵泡刺激素基因的克隆、序列分析及表达载体构建[D];东北农业大学;2003年
5 魏晓峰;花粉/种子表达融合启动子合成及其表达载体构建[D];西南大学;2010年
6 张哲敏;不同抗寒/冻性葡萄CBF_2基因克隆分析及表达载体构建[D];甘肃农业大学;2012年
7 穆延召;玉米耐旱相关基因ZmHDZIV13和ZmHDZIV14的克隆、分析及表达载体构建[D];甘肃农业大学;2013年
8 姜婧怡;αA晶体蛋白基因启动子与HSP70基因融合表达载体构建及其在半乳糖诱导大鼠晶状体组织的表达[D];遵义医学院;2013年
9 王伟;IL10-HGF表达载体构建及其抑制肝癌细胞HepG_2增殖的研究[D];南华大学;2011年
10 段月娇;刺糖多孢菌表达载体构建及转化条件研究[D];天津大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978