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鸡FABP基因克隆、表达特性及功能研究

王启贵  
【摘要】:FABPs属于脂结合蛋白超家族成员,是一类分子量较小而对脂肪酸有高亲和力的蛋白质,广泛的存在于脊椎动物和非脊椎动物的细胞质中。FABPs担当细胞内脂肪酸的运输任务。它们与脂肪酸结合将其运输到脂肪酸氧化的位置、脂肪酸脂化成甘油三酯或磷脂的位置,或者进入细胞核内发挥其可能的调控功能。因此FABPs对脂类代谢具有重要的调控作用。本研究以哺乳动物FABP基因序列为基础,通过比较基因组学和生物信息学等方法克隆鸡的FABP基因;采用Northern blot和RT-PCR方法研究FABP基因的时空表达规律。以F_2资源群体和肉鸡高低脂双向选择品系为研究材料,采用测序和PCR-SSCP的方法检测鸡FABP基因的多态性,并进行基因多态性与生长和体组成性状的相关分析。主要研究结果如下: (1)克隆了鸡A-FABP、H-FABP、I-FABP基因的cDNA序列和基因组序列及L-FABP基因的基因组序列;基因结构分析表明这些基因都由4个外显子和3个内含子构成。 (2)Northern blot分析表明鸡A-FABP基因在2、6和12周龄鸡只检测的各种组织中仅在脂肪组织中表达;在检测的各时期(2、6、10和12周龄),该基因在脂肪组织中的表达水平在两品种(肉鸡高脂系和白耳)公鸡间无明显差异。RT-PCR分析表明鸡A-FABP基因在6和12周龄鸡只检测的各种组织中仅在脂肪组织中表达。 (3)Northern blot分析表明鸡H-FABP基因在2、6和12周龄鸡只检测的各种组织中在大脑、肺脏、肌胃、腺胃、腿肌、胸肌、心脏、卵巢和脂肪等多种组织中表达;在检测的各时期(2、6和12周龄),该基因脂肪组织中的表达水平在两品种(肉鸡高脂系和白耳)公鸡间无明显差异;在6周龄心脏组织中的表达水平在两品种(肉鸡高脂系和白耳)公鸡间有显著的差异(P<0.05),肉鸡的表达低于同周龄的白耳鸡。RT-PCR分析表明鸡H-FABP基因在6和12周龄所检测的所有组织中均表达。 (4)Northern blot分析表明鸡I-FABP基因在2、6和12周龄鸡只检测的各种组织中仅在小肠组织中表达;在检测的各时期(2、6和12周龄),该基因在6周龄小肠组织中的表达水平在两品种(肉鸡高脂系和白耳)公鸡间有显著的差异(P<0.05),肉鸡的表达低于同周龄的白耳鸡。RT-PCR分析鸡I-FABP基因在6和12周龄检测的组织中在小肠、肾脏、脾脏、肺脏、心脏、肌胃、腺胃、腿肌、胸肌和卵巢等多种组织中表达。 (5)Northern blot分析表明鸡L-FABP基因在2、6和12周龄鸡只检测的各种组织中仅在肝脏和小肠组织中表达;在检测的各时期(2、6和12周龄),该基因在6周龄小肠组织中的表达水平在两品种(肉鸡高脂系和白耳)公鸡间有极显著的差异(P<0.01),在6和12周龄时肝脏组织中的表达在两品种间也有极显著的差异(P<0.01),并且都是肉鸡的表达低于同周龄的白耳鸡;L-FABP基因在19胚龄的低脂系肉鸡中的表达显著地低于同时期的高脂系肉鸡(P<0.05);在出生后10日龄的低脂系中的表达显著地高于在高脂系中的表达(P<0.05)。RT-PCR分析鸡L-FABP基因在6周龄10种组织和12周龄15种 东北农业大学农学博士学位论文 组织中在肝脏、辜丸、小肠、肾脏、脾脏、肺脏、心脏、肌胃、腺胃、腿肌和脚肌等多 种组织中表达。 (6)在鸡A-FABP基因的外显子1和内含子111中发现两个多态位点,分别为外显子l 中的Taql酶切多态位点和内含子m中助比I酶切多态位点。A.EABP基因多态性与鸡 的体重、腹脂重和腹脂率等生长和体组成性状显著相关(P0.05)。 (7)在鸡H.FABP基因的内含子n中检侧到两个序列多态性位点,分别为14bp插入l 缺失的变异位点和入仑。1酶切多态位点。H-EABP基因的多态性与鸡腹脂重和腹脂率显著 相关( P0‘05)。 (8)在鸡I.FABP基因的内含子n和内含子I中发现两个多态性位点,分别是内含子n 中的snaBI酶切多态位点和内含子I中的尸叨才n酶切多态位点。LEABP基因的多态性与 鸡的体重显著或极显著相关(P0.05或P0 .01)。 (9)在鸡L-EABP基因5’侧翼区检测到两个多态性位点,分别为起始密码子(ATG)上 游G204A和T205C突变。两个多态性位点的单倍型与鸡腹脂重和腹脂率显著相关 (P0 .05)


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