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维生素E缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡的机理

张金龙  
【摘要】: 用低维生素E(V_E)和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡,建立V_E缺乏雏鸡模型,通过半定量RT-PCR技术、流式细胞术、碱性SCGE、DNA片段化定量分析以及DNA Ladder分析并结合形态学观察等方法对雏鸡脾脏淋巴细胞的形态、DNA损伤、Caspase-3活性、Bcl-2、p53和Caspase-3 mRNA表达水平进行观测,旨在探讨V_E缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞的凋亡机制。研究结果表明: 1.光学显微镜下观察到试验组雏鸡脾脏淋巴细胞核染色致密浓集,部分核仁消失,胞膜完整,呈现凋亡变化。透射电镜下观察到核染色质浓缩边集于核膜下,胞质浓缩,细胞器聚集,电子密度增高,细胞核固缩,细胞间连接消失,有凋亡小体出现。AO/EB双荧光染色后荧光显微镜下观察发现试验雏鸡淋巴组细胞呈现橙红色。表明V_E缺乏能够诱导雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡。 2.流式细胞仪检测,试验组G_0/G_1峰前出现凋亡峰,细胞增殖指数降低,细胞凋亡率升高,与对照组比较差异极显著(p<0.01)。表明V_E缺乏可促进淋巴细胞凋亡,抑制淋巴细胞增殖。 3.碱性SCGE检测发现试验组雏鸡淋巴细胞出现彗星拖尾现象;DNA片段化定量分析发现试验组淋巴细胞DNA片段化程度增加,与对照组比较差异极显著(p<0.01);经DNA Ladder分析,试验组淋巴细胞出现典型的DNA梯形带。表明V_E缺乏能够引发雏鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤。 4.V_E缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3蛋白酶活性高于对照组,组间差异极显著(p<0.01)。表明V_E缺乏可通过激活凋亡关键酶Caspase-3而导致雏鸡脾脏淋巴细胞发生凋亡。 5.抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平低于对照组,而促凋亡基因p53和Caspase-3 mRNA表达水平高于对照组,组间差异极显著(p<0.01)。表明V_E缺乏通过影响凋亡相关基因的表达而诱导淋巴细胞凋亡。 本研究从淋巴细胞的形态、DNA损伤、酶活性及凋亡基因表达水平等角度入手,从分子水平揭示了V_E缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡的机制,该研究成果可为揭示V_E缺乏雏鸡免疫细胞损伤和免疫抑制机理提供理论依据。


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