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口蹄疫病毒VP2蛋白B细胞线性表位的鉴定

徐宗香  
【摘要】: 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。易感动物如黄牛、绵羊、山羊和猪等。口蹄疫被世界动物卫生组织列为必须通报的动物传染病。对口蹄疫的预防和诊断,需要建立在对病毒蛋白抗原结构与功能的研究之上。本研究首先利用大肠杆菌表达系统表达了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白,抗原性检测结果表明表达产物能被Asia1型口蹄疫感染血清所识别。 为了分析Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的优势抗原表位区,设计了7个覆盖整个Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的多肽片段,分别进行融合表达,经Western blot分析表明只有融合蛋白TrxA-F1(1~44aa)能够被Asia1型口蹄疫感染血清所识别,鉴定表明1~44aa为Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B细胞线性抗原表位区。本实验同时证实,O型、A型、C型口蹄疫标准血清和感染SAT2型口蹄疫康复期的牛血清也能识别表达的融合蛋白TrxA-F1。为了进一步鉴定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B细胞线性线性抗原表位区,设计了6个覆盖F1(1~44aa)的多肽片段,每一个多肽片段合成一对寡核酸片段,经磷酸化、退火后插入表达载体pET-32a进行融合表达,表达的6个融合蛋白经切胶的方法进行纯化。经Western-Blot进一步鉴定出了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B细胞线性抗原表位区位于N末端的6~15aa区域。 在鉴定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的基础上,对Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2进行氨基酸序列的比对,结果表明在两者N末端的1~31氨基酸序列完全一致。所以,可以只针对O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa进行B细胞抗原表位的鉴定,设计了3个相互重叠的多肽片段覆盖O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa区域。经克隆表达,Western blot鉴定在此区域未鉴定出B细胞线性抗原表位。 综合上述实验结果,Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2蛋白的B细胞线性抗原表位区N末端的6~15aa区域,而此区域也是其它血清型口蹄疫病毒的一个B细胞线性抗原表位区。对口蹄疫病毒VP2蛋白进行抗原表位鉴定,可以进一步了解口蹄疫病毒的抗原结构,为进一步研究其功能及口蹄疫的诊断和疫苗的研制奠定基础。


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