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猪卵母细胞孤雌激活方法的研究

赵金凤  
【摘要】: 本研究以猪体外成熟卵母细胞为实验材料,分别采用了单次电激活,二次电激活,化学激活以及物理化学联合激活方法,对猪体外成熟卵母细胞进行孤雌激活,并比较分析了各方法的激活效果。旨在选择出较好的孤雌激活方法,以提高猪体外成熟卵母细胞的孤雌激活率和孤雌胚的囊胚发育率,为提高核移植的成功率,以及进一步研究奠定基础。 本研究包括以下主要内容:1.选择不同的电场强度和脉冲时程,做单次电激活,比较不同组合对激活效率的影响。2.固定脉冲时程及脉冲次数,分别选择不同的电场强度,做二次电激活,比较不同组合对孤雌激活胚早期发育的影响。3.不同浓度Ionomycin作用不同时间;Ionomycin分别与6-DMAP、CB及CHX组合;9% Ethanol作用不同时间,对每一组合的激活效率进行比较,旨在研究较好的化学激活方法。4.电激活处理结合化学试剂(6-DMAP、CB及CHX),比较不同组合对体外成熟卵母细胞孤雌激活后孤雌胚早期发育的影响。 研究结果表明: 1.对于单次电刺激对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活参数的确定,电场强度为2.0kV/cm,脉冲次数为1次,脉冲时程分别为10、20和30μs的条件对孤雌胚早期发育的影响无显著差异,且均为较优条件,其中以脉冲时程为30μs最为理想; 2.对于二次电刺激对猪体外成熟卵母细胞的孤雌激活参数选择,二次电场强度分别2.0kV/cm和1.4kV/cm,脉冲时程均为30μs,脉冲次数均为1次的条件为最优; 3.不同浓度Ionomycin作用不同时间对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活效果的影响,Ionomycin浓度为20mmol/L,作用时间为10min、15min的条件较好,10min最为理想; 4. Ionomycin分别与6-DMAP、CB组合对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活后,孤雌胚的卵裂率和囊胚率高于Ionomycin与CHX组; 5. 9% Ethanol作用10min、20min组合对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活后,孤雌胚的卵裂率和囊胚率均显著高于作用30min、40min,前二者之间差异不显著; 6.电刺激处理后应用6-DMAP或CB处理对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活效率显著优于电处理后应用CHX。


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