绵羊Klf4和Lin28基因的克隆与序列分析

【摘要】：自小鼠iPS获得成功以来,iPS技术获得不断完善。已研究证实,Oct4、Sox2、Klf4、lin28和Nanog等是重要的iPS诱导因子。迄今为止尚未见有关绵羊的iPS诱导因子获得绵羊iPS的相关报道。本研究采用分子生物的方法,在克隆获得绵羊Klf4和Lin28因子的基础上,对其序列进行了分析并预测了相关蛋白的特征,该项研究为进一步完善绵羊的iPS方法奠定了基础。通过本实验获得了如下的结果。 (1)参照GenBank上牛、猪和小鼠等序列,利用胎绵羊的肠和肾组织,采用RT-PCR方法,分别克隆获得1434bp的绵羊Klf4基因的编码区序列和631bp的绵羊Lin28基因的编码区序列。 (2)采用DNAStar、DNAMAN软件和(?)GenBank数据库资料对所克隆的绵羊Klf4基因编码区序列进行分析,结果与牛、猪和小鼠等的Klf4基因编码区序列具有较高的同源性,其中与牛的同源性达到98.2%；采用相同方法分析绵羊KLF4蛋白的预测结果,与牛、猪和小鼠等的KLF4蛋白同样具有较高的同源性,其中与牛的同源性可达99.7%。 (3)利用在线工具Motif Scan对绵羊KLF4蛋白的分析显示,绵羊KLF4含有细胞核定位模体以及锌指结构域。 (4)采用DNAStar、DNAMAN软件和GenBank数据库资料对所克隆的绵羊Lin28基因编码区序列进行分析,结果与牛、猪和小鼠等的Lin28基因编码区序列具有较高的同源性,其中与小鼠的同源性可达98.9%；采用相同方法分析绵羊LIN28蛋白的预测结果,与牛、猪和小鼠等LIN28蛋白的同样具有较高的同源性,其中与小鼠的同源性达99.5%。 (5)利用在线工具Motif Scan对绵羊LIN28蛋白的分析显示,LIN28含有含有细胞核定位模体、CCHC型锌指结构和冷休克结构域。 综上所述,本研究成功克隆获得绵羊Klf4和Lin28基因的编码序列,能否利用其提高绵羊iPS的诱导效率有待于探讨。