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东北林蛙(Rana dybowskii)体表细菌分离鉴定及生境微生物分析

张建平  
【摘要】:两栖动物生活环境复杂,其潮湿裸露的皮肤为外界微生物寄居提供了有利条件。目前全球两栖类动物种群正在大幅下降,已有研究显示两栖动物体表常驻微生物群对两栖动物可能起到保护作用。通过对健康两栖动物体表常驻菌种类的研究,将有助于进一步了解两栖动物皮肤防御体系的保护作用,对人工养殖蛙类的疾病防控也具有一定的指导意义。 本研究以东北地区两栖动物优势物种东北林蛙(Rana dybowskii)为研究对象,收集通河地区及宝泉岭人工养殖地区东北林蛙体表微生物,用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板培养,通过分离纯化获得单菌落,用16S rDNA技术、生化试验检测鉴定细菌。得到东北林蛙体表细菌种类,结合已有研究分析其对东北林蛙的保护作用。采用Biolog生态板进行微生物接种培养,根据微生物消耗碳源产生代谢产物与染料反应显色的原理,利用微生物的代谢特征指纹(Metabolic Profiles)通过酶标仪检测,判定微生物对不同碳源利用度,分析东北林蛙体表及其生境中微生物群落水平多样性(Community-level Physiological Profiles, CLPP),对微生物多样性进行分析,比较通河及宝泉岭东北林蛙体表与其生境微生物的关系。 结果鉴定出东北林蛙体表细菌,其中包括:肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、假单胞菌科(Pseudomonaceae)、奈瑟氏球菌科(Neisseriaceae)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)、微球菌科(Micrococcaceae)等24种细菌。用16S rDNA分析鉴定了通河地区东北林蛙体表主要有为金黄杆菌和不动杆菌,为通河东北林蛙背部和腹部所共有;在其背部发现有氧化烃微杆菌(Microbacterium hydrocarbonoxydans)等细菌,腹部有黄杆菌泡囊短波单胞菌(Brevundimonas vesicularis)等。其细菌种类差距,可能与不同部位接触的环境或功能不同有关。CLPP分析结果显示,东北林蛙体表菌群与生境微生物有显著差异,初步推测东北林蛙体表细菌群落并不与其生境微生物群落完全匹配;通河地区与宝泉岭地区的东北林蛙体表菌群多样性不同,表明其细菌群落可能受环境微生物的影响;此外,东北林蛙个体间的体表菌群也都存在差异,推测蛙体表菌群也可能与蛙个体遗传等因素的影响有关。


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