收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

水曲柳胚性愈伤组织超低温保存技术优化研究

刘莹莹  
【摘要】:水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)直接体细胞胚胎发生体系已经建立,但仍然存在体细胞胚质量不高、同步化效果差、畸形胚发生率高的问题,尚不适合大规模工厂化育苗应用,所以水曲柳组织培养仍面临着完善离体再生体系及实现水曲柳组培苗规模化生产的严峻挑战。间接体细胞胚胎发生更适合于大规模工厂化育苗应用,但是胚性愈伤组织在长期继代增殖过程中不可避免出现细胞变异率增加、胚性丧失的情况,很难达到长期稳定保存的目的。为了最大程度地保持种质材料的遗传稳定性和形态发生的潜能,需开发出适合水曲柳优良基因材料的超低温保存方法。本研究以水曲柳胚性愈伤组织为材料,优化水曲柳胚性愈伤组织程序降温法超低温保存技术、探索玻璃化法超低温保存方法、分析超低温保存过程中材料的细胞存活率和生理生化差异,主要结果如下:(1)选取继代培养生长旺盛、状态良好的胚性愈伤组织,在0.4 mol·L-1山梨醇溶液中室温下预培养20 h,然后在添加7.5%二甲基亚砜溶液中于0℃下脱水90 min,在-80℃超低温冰箱中冷冻2 h,随后迅速投入液氮中进行保存。冷冻保存24 h后,在40℃水浴中解冻 2 min,最后在(WPM+0.1 mg·L-1 6-BA+0.15 mg·L-1 2,4-D)上进行恢复培养。经过程序降温法超低温保存后,愈伤组织细胞存活率最高为80.82%,鲜重恢复培养60 d时可达1.93 g,愈伤组织再生率为100%,愈伤组织增殖系数为2.79,分化率为56.83%,出苗率达到了 23.59%。(2)选取继代培养7~10 d生长旺盛、状态良好的胚性愈伤组织,经过玻璃化法超低温保存后,最佳预培养方法是在0.5 mo 1·L-1蔗糖培养基上预培养3 d,然后在(2 mol·L-1丙三醇+0.4 mol·L-1蔗糖+WPM液体培养基)装载培养60 min,随后在2 mL的PVS2(30%丙三醇+15%DMSO+15%乙二醇+0.4 mol·L-1蔗糖+WPM液体培养基)溶液中脱水50 min,经过液氮冷冻后,最后在40℃水浴锅中解冻2 min。细胞存活率最高为61.94%,鲜重恢复培养60 d时可达1.82 g,愈伤组织增殖系数为2.69,分化率为53.87%,出苗率达到了 20.97%。(3)在预培养和恢复培养过程中,程序降温法处理下的可溶性糖含量高于玻璃化法超低温保存(分别为103.84 mg·g-1FW、89.28 mg·g-1FW);在脱水过程中,程序降温法超低温过程中的脯氨酸、可溶性蛋白和淀粉的含量均高于玻璃化法超低温保存;在解冻过程中,玻璃化超低温处理下的丙二醛含量高于程序化超低温保存(3.56 μmol·g-1FW、3.03μmol·g-1FW)。因此,程序降温法超低温与玻璃化法超低温相比较,更适用于水曲柳胚性愈伤组织的超低温保存。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 郭玉琼;赖钟雄;吕柳新;;玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生[J];福建农林大学学报(自然科学版);2007年01期
2 陈冠群;李晓丹;申晓辉;;百子莲胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存体系建立及遗传稳定性分析[J];上海交通大学学报(农业科学版);2014年05期
3 郭玉琼;赖钟雄;吕柳新;;玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织的初步探讨[J];福建农业大学学报;2006年03期
4 洪森荣;尹明华;王艾平;;江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的玻璃化法超低温保存及植株再生[J];广西植物;2014年03期
5 洪森荣;尹明华;王艾平;;江西铅山红芽芋胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存技术的研究[J];植物研究;2014年03期
6 胡明珏,王君晖;拟南芥悬浮细胞系的玻璃化法超低温保存[J];细胞生物学杂志;2004年01期
7 石茹;王芳;王舰;;玻璃化法超低温保存技术及其研究进展[J];北方园艺;2011年24期
8 王君晖,黄纯农;玻璃化法──园艺作物茎尖和分生组织超低温保存的新途径──文献综述[J];园艺学报;1994年03期
9 覃灵华;刘华英;;玻璃化法超低温保存植物种质资源及其研究进展[J];作物杂志;2008年03期
10 李红民;马晖玲;;玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生[J];甘肃农业大学学报;2009年04期
11 吴怡;顾雅坤;符丽;曾琳;;莪术茎尖玻璃化法超低温保存技术[J];热带农业科学;2018年04期
12 李腾敏;徐立;李志英;;牛大力腋芽小滴玻璃化法超低温保存后遗传稳定性分析[J];广东农业科学;2013年15期
13 刘剑锋;阎秀峰;程云清;周晓梅;;高山红景天愈伤组织的玻璃化法保存及植株再生[J];北京林业大学学报;2007年02期
14 陈红;韩晓莹;;李茎尖包埋玻璃化法超低温保存的条件探索[J];山地农业生物学报;2013年03期
15 李艳娜;尉义明;胡桂兵;陈厚彬;徐春香;;香蕉胚性细胞悬浮系玻璃化法超低温保存及再生植株遗传稳定性分析[J];园艺学报;2010年06期
16 娄汉平;郭修武;代汉萍;;树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存[J];中国农学通报;2010年18期
17 曾继吾;牛王翠;黄永红;孙中海;黄秉智;易干军;周碧容;;利用超低温保存方法脱除香蕉束顶病毒的研究[J];植物遗传资源学报;2009年03期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 靳小翠;杨模华;李志辉;张冬林;丁贵杰;;马尾松幼胚胚性愈伤组织诱导研究[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
2 黄枝英;赖钟雄;;荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体高频率再生[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
3 刘宝光;李成浩;王伟达;张含国;;红皮云杉胚性愈伤组织诱导技术研究[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
4 张国珍;董雪云;孙跃志;;坡向和坡位对水曲柳中龄人工林生长与生物量分配的影响[A];第九届中国林业青年学术年会论文摘要集[C];2010年
5 万婷;;油松胚性愈伤组织诱导的初步研究[A];第九届中国林业青年学术年会论文摘要集[C];2010年
6 张朝军;李付广;刘传亮;武芝霞;王玉芬;李凤莲;;棉花新诱导的胚性愈伤组织快速分化胚状体研究[A];中国棉花学会2004年年会论文汇编[C];2004年
7 王起华;张恩栋;周春影;;藻类种质超低温保存研究概况[A];中国藻类学会第十一次学术讨论会论文摘要集[C];2001年
8 郭余龙;李名扬;罗小英;裴炎;;用基因枪法将外源基因导入棉花胚性愈伤组织[A];重庆市遗传学会第一届学术年会暨纪念孟德尔规律再发现100周年学术讨论会论文集[C];2000年
9 胡家金;邹剑锋;熊兴耀;刘志敏;刘明月;;玻璃化法超低温保存马铃薯茎尖的研究[A];2006年中国作物学会马铃薯专业委员会年会暨学术研讨会论文集[C];2006年
10 李明军;周娜;刘杰;张晓丽;赵喜亭;;包埋玻璃化法超低温保存怀山药种质的技术研究[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
11 赵章杏;;大麦胚性和非胚性愈伤组织的细胞学观察[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
12 龙伟;陈琴;刘伟东;边黎明;施季森;;花旗松胚性愈伤玻璃化法超低温保存研究[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
13 吕长平;栾爱萍;陈海霞;郭韬;李琛;;玻璃化法超低温保存非洲菊茎尖及植株再生[A];中国观赏园艺研究进展2012[C];2012年
14 李明军;赵喜亭;张晓丽;李海兵;宋萍萍;刘文英;赵姣;;怀山药种质超低温保存技术的比较研究[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
15 王君晖;边红武;黄纯农;;抗冻蛋白应用于水稻悬浮细胞超低温保存的研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
16 林田;刘艳霞;刘灶长;罗利军;;百合玻璃化超低温保存初步研究[A];中国园艺学会球根花卉分会2008年会暨球根花卉产业发展研讨会论文集[C];2008年
17 陈辉;陈晓玲;陈龙清;卢新雄;;切花百合离体茎尖玻璃化法超低温保存研究[A];第五届全国低温生物医学及器械学术大会会议论文集[C];2006年
18 米文广;真田哲朗;;梨培养茎尖超低温保存[A];中国园艺学会首届青年学术讨论会论文集[C];1994年
19 邹建军;李绍臣;王培忠;;黄菠萝茎尖玻璃化法超低温离体保存技术的研究[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
20 翟晓巧;程斐;;豫杂一号泡桐茎尖的玻璃化法超低温保存研究[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前17条
1 任丽;拟南芥幼苗对玻璃化法超低温保存的逆境响应机制[D];上海交通大学;2014年
2 郭玉琼;龙眼、荔枝胚性培养物超低温保存研究[D];福建农林大学;2007年
3 张鹏;不同发育阶段水曲柳种子的休眠与萌发生理[D];东北林业大学;2008年
4 于娅;光质和油菜素内酯对棉花胚性愈伤组织影响初析[D];中国农业科学院;2019年
5 王敏瑞;苹果带毒茎尖超低温保存与茎尖超低温技术对病毒脱除和保存效应的研究[D];西北农林科技大学;2019年
6 孙丽芳;玉米胚性愈伤组织形成相关基因克隆及功能分析[D];吉林大学;2012年
7 江舟;玉米幼胚胚性愈伤组织诱导过程中重要miRNA及靶基因的功能研究[D];四川农业大学;2013年
8 胡成栋;同种异体肌腱玻璃化法冷冻保存的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
9 徐艳;观赏蕨类植物种质超低温保存研究[D];北京林业大学;2006年
10 魏民;玻璃化法保存异体动脉的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
11 刘迪;水曲柳种子脱水耐性蛋白质组和转录组学研究[D];东北林业大学;2013年
12 殷振芳;百合(Lilium)离体植株再生及超低温保存研究[D];西北农林科技大学;2014年
13 冯超红;苹果茎尖超低温保存技术及脱毒效率的研究[D];西北农林科技大学;2014年
14 卫星;干旱胁迫对水曲柳苗木细根衰老的影响[D];东北林业大学;2008年
15 罗旭;玉米幼胚胚性愈伤组织诱导能力全基因组遗传解析及候选基因功能研究[D];四川农业大学;2016年
16 孙丽丽;新型化学镀法制备木质电磁屏蔽材料的研究[D];东北林业大学;2013年
17 艾鹏飞;部分柿属植物种质资源离体保存及其遗传稳定性研究[D];华中农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 刘莹莹;水曲柳胚性愈伤组织超低温保存技术优化研究[D];东北林业大学;2021年
2 李晓丹;百子莲胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存技术的研究[D];东北林业大学;2013年
3 谢玉明;荔枝体细胞胚胎发生及种质超低温保存研究[D];湖南农业大学;2003年
4 何广深;百子莲胚性愈伤组织超低温保存中钙离子的分布变化及逆境应答机制初探[D];上海交通大学;2014年
5 李泳;罗汉果茎尖小滴玻璃化法超低温保存及其遗传稳定性研究[D];广西师范大学;2014年
6 倪燕妹;橡胶树易碎胚性愈伤组织诱导、长期继代培养及其植株再生研究[D];海南大学;2010年
7 张亚伟;氮磷施肥下水曲柳人工林生长与营养诊断[D];东北林业大学;2020年
8 刘炜洋;水曲柳天然更新及其影响因子研究[D];东北林业大学;2008年
9 夏祥友;水曲柳人工混交林土壤水分动态研究[D];东北林业大学;2005年
10 卢艳;初生休眠解除状态不同的水曲柳种子对干燥处理和热休眠诱导的萌发响应[D];东北林业大学;2020年
11 袁慧;水曲柳-落叶松人工混交林种间效应研究[D];东北林业大学;2015年
12 张宇;水曲柳体细胞胚胎发生的同步化调控[D];东北林业大学;2007年
13 魏骋;水曲柳胚性愈伤组织和胚胎超低温保存研究[D];东北林业大学;2019年
14 彭春雪;红松体胚成熟培养与胚性愈伤组织保存研究[D];东北林业大学;2019年
15 陈思齐;水曲柳胚性愈伤组织的诱导及组培苗悬浮培养的研究[D];东北林业大学;2019年
16 周婵;香樟胚性愈伤组织诱导、增殖及抗寒性鉴定体系的建立[D];南阳师范学院;2019年
17 周思宇;枇杷叶片和叶脉胚性愈伤组织诱导及其与内源激素的关系[D];四川农业大学;2017年
18 高芳;红松体细胞胚胎发生与植株再生[D];东北林业大学;2017年
19 张莹莹;湿地松胚性愈伤组织诱导和增殖初步研究[D];江西农业大学;2018年
20 周广振;橡胶树花药愈伤组织遗传转化受体系统的优化及橡胶树HbCERK1基因的转化[D];海南大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 记者 张玺 通讯员 焦德芳 全莉;新型细胞超低温保存技术取得突破[N];工人日报;2019年
2 梁素梅;家具市场纠纷多[N];天津日报;2008年
3 齐联;宁夏白蜡嫁接水曲柳获得成功[N];中国绿色时报;2007年
4 尹宪军;一个承诺,他坚守18年[N];中国绿色时报;2008年
5 宏军;什么是经济型装修[N];中国商报;2001年
6 何丽华;普通地板换“洋名”白蜡木原是水曲柳[N];中华建筑报;2006年
7 高天鹤;赵希海 从伐木能手到植树大王[N];中国环境报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978