欧美山杨杂种愈伤组织再生系统的建立及体细胞无性系变异的分析

【摘要】：本文以欧美山杨杂种(Populus tremula×P．tremuloides)20个优良无性系为研究材料，取叶片、叶柄、茎段作为外植体，用WPM、NT、IS、MS加入不同生长调节物质作为培养基，对欧美山杨杂种愈伤组织再生途径的快繁系统进行了研究，同时对其再生植株的染色体进行统计，对基因组DNA变异进行AFLP分析，所得结果如下： 1、确定愈伤组织再生途径快繁的最适培养基为：WPM+1.0 mg／L 6-BA+(0.1～0.5)mg／L NAA+2％蔗糖，40天，可经愈伤组织分化形成不定芽，分化率为98.33％。 2、确定诱导欧美山杨杂种直接形成不定芽快繁的最适培养基为：WPM+1.0 mg／L6-BA+2％蔗糖，能快速出芽(20天)，形成的不定芽量大，出芽率为92％。从而解决了老龄欧美山杨杂种不易诱导分化的问题。 3、不同生长调节物质诱导的再生植株染色体数量均发生不同程度的变化，6-BA诱导直接出芽的植株染色体数目变异较小；与6-BA相比，2，4-D诱导后的再生植株不但使染色体数目发生变异，而且也使染色体形态发生变异。 4、筛选出适于欧美山杨杂种AFLP分析的12对引物。完善了适合于欧美山杨杂种总DNA多态性分析的AFLP技术 5、6-BA和2，4-D所诱导的再生植株表现出不同程度的DNA多态性：2，4-D诱导后的再生植株共检出3457个AFLP片段，其中多态性片段895个，占25.89％；6-BA诱导直接出芽植株共检测出2867个AFLP片断，其中多态性片段565个，占19.71％。 6、再生植株的AFLP多态性与培养时间有关。随培养时间的增加，AFLP多态性也会明显增加。 7、经过再生植株的染色体数量和DNA变异的AFLP分析，筛选出WPM+1.0 mg／L6-BA培养基是诱导欧美山杨杂种高效快繁、后代变异小的培养基。