收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

柽柳抗逆分子机理研究与相关基因的克隆

王玉成  
【摘要】:柽柳是抗逆能力强的植物,可以在干旱和盐渍化土壤上良好生长。以柽柳为主要研究材料,应用差异显示、消减杂交、EST分析、基因芯片等技术研究其抗逆分子机理,并对部分抗逆基因进行克隆。 建立了两种木本植物总RNA的提取方法。两种方法均以硼砂为缓冲液,分别用SDS、和CTAB为主要提取试剂,可以提取出高质量的木本植物总RNA;SDS方法同时可以用于真菌、昆虫等的RNA提取。对LiCl沉淀方法进行了重要改进,改进的方法可在10min内完全沉淀RNA。 用差异显示技术研究了NaHCO_3胁迫下柽柳的基因表达情况,经Northern检测共获得了17个基因片段,BlastX分析表明,有2个基因与F-box类蛋白家族成员同源性较高。1个基因与翻译起始因子eIF成员有高的同源性。还获得了分别与分泌型过氧化物酶和过氧化物酶基因同源性高的基因片段,过氧化物酶为植物对抗逆境胁迫的常见基因。另外,有5个与盐碱胁迫密切相关的新序列,它们在胁迫前后差异表达明显。这17个序列的GenBank接受号为CD028574-CD028581和CD028583-CD028591。 应用消减杂交技术研究了NaHCO_3胁迫下柽柳的基因表达情况,以NaHCO_3胁迫柽柳cDNA为试验方(tester),正常生长柽柳cDNA为驱动方(Driver)。经Northern杂交检测,共获得36个盐胁迫应答基因。BlastX分析表明,它们与下列基因同源:CAT和PRDX 2个抗氧化酶基因;编码海藻糖磷酸酯酶的基因;多种调控基因,包括bZIP转录因子、MADS-box蛋白,富含甘氨酸RNA结合蛋白(Glycine-rich RNA-binding proteins)、CCCH型锌指蛋白、F-box蛋白等的调控基因;早期光诱导蛋白,该基因可以修复由胁迫引起的植物光合系统损伤;半胱氨酸蛋白酶和VPE酶(vacuolar processing enzyme),它们起降解受损细胞作用;以及脂质转移蛋白前体、聚合泛素、查尔酮合酶、谷胱甘肽转移酶、NADP-IDH、OEE1等;同时,发现了6个盐胁迫应答的新基因。 用差异显示技术研究了NaHCO_3胁迫下星星草的基因表达情况,经反向Northern检测,获得了7个差异表达基因片段。其中,6个为胁迫后诱导表达的基因,1个为胁迫后抑制表达的基因。序列同源性分析表明,诱导表达的6个基因中,1个与钙依赖性蛋白激酶(CDPK)同源性较高,其余5个为新序列,胁迫后抑制表达的基因与假定adaptor蛋白同源性较高。结果提示,在NaHCO_3胁迫后,星星草可能通过CDPK正向调控其抗盐能力,并调控胁迫信号的转换。获得的7个基因片段已经在GenBank登录,登录号为CF198398—CF198404。 构建了柽柳的cDNA文库。以NaHCO_3胁迫的柽柳为材料建立了cDNA文库,文库的初始滴度为5.7×10~5pfu,重组率为96%,插入片段平均长度约1.2kb,扩增后文库的滴度为3.9×10~9pfu/mL。 对柽柳进行了EST分析,共获得2455条ESTs序列,它们代表了1936条无重复的单一序列(unique sequence)。共有1452条ESTs与已知基因序列同源,其中:1452条ESTs与Nr数据库蛋白同源,其余1386条为新序列。对EST进行了GO(Gene


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 施宝顺,恰加;星星草的栽培利用技术[J];青海草业;2001年04期
2 李晶,阎秀峰,孙国荣;星星草地上部四种微量元素的季节动态[J];草地学报;2002年04期
3 周波;许志丹;;星星草对盐碱草地的适应性及改良作用的研究现状[J];吉林师范大学学报(自然科学版);2005年04期
4 张丽辉;赵骥民;杨允菲;;放牧和割草利用对星星草种群冬眠构件的影响[J];草业科学;2006年04期
5 孙艳春;邸立群;;星星草及其种植[J];养殖技术顾问;2006年05期
6 杨春武;贾娜尔·阿汗;石德成;张艳;杨亚军;;复杂盐碱条件对星星草种子萌发的影响[J];草业学报;2006年05期
7 张丽辉;杨允菲;;松嫩平原星星草分蘖丛构件的定量分析[J];安徽农业科学;2006年20期
8 孙艳春;邸立群;;星星草及其种植[J];农村实用科技信息;2006年10期
9 沙伟;滕兆岩;倪红伟;;正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究[J];中国草地学报;2006年06期
10 孙艳春;邸立群;;星星草及其种植[J];农村实用科技信息;2007年03期
11 沙伟;滕兆岩;王岩;佟璐;;星星草耐盐性研究进展[J];齐齐哈尔大学学报(自然科学版);2007年02期
12 任丽;王瑶;李欣;;抗盐碱植物星星草的研究进展[J];林业科技情报;2008年04期
13 张丽辉;史超硕;赵骥民;;松嫩平原星星草无性系生殖分蘖株数量性状的定量研究[J];黑龙江畜牧兽医;2009年13期
14 宣立峰;张睿;于占国;;星星草种植的方法及对碱化草场的影响[J];养殖技术顾问;2011年03期
15 范亚军;张丽辉;;割草对星星草种群数量特征的影响[J];安徽农业科学;2012年15期
16 尤海洋;;星星草在重度盐碱化草地的种植技术[J];当代畜牧;2013年03期
17 唐超世;方伋;王守礼;李留根;孙连生;李文明;;星星草栽培驯化的研究报告[J];畜牧兽医科技通讯;1980年02期
18 唐超世;方伋;王守礼;李留根;孙连生;李文明;;星星草栽培驯化的研究[J];中国草原;1980年04期
19 孙泱;苏打碱化盐渍土种植星星草的条件和技术[J];土壤通报;1987年02期
20 徐爱国;种植星星草改碱[J];黑龙江畜牧兽医;1989年05期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 李玉花;聂玉哲;张旸;解莉楠;;星星草抗盐碱相关基因的筛选及相关蛋白相互作用网络初步预测[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
2 孙国荣;陈刚;彭永臻;岳中辉;马东辉;那守海;阎秀峰;;星星草的生长对盐碱土壤氮素营养以及氮沉积对松嫩盐碱草地植被演替的影响[A];城市生态建设与植被恢复、重建技术交流研讨会论文集[C];2007年
3 郭立泉;;盐、碱胁迫下星星草有机酸代谢调节的比较研究[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
4 喻娟娟;孙国荣;戴绍军;;星星草(Puccinellia teniflora)响应NaCl胁迫蛋白质组学研究[A];第三届全国植物蛋白质组学大会摘要集[C];2010年
5 梁也男;王玉成;刘桂丰;褚延广;;cDNA微阵列技术研究干旱胁迫下星星草基因的表达[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
6 滕兆岩;王艳丽;石小燕;沙伟;;星星草RAPD-PCR反应体系建立与优化[A];第二届热带亚热带植物资源的遗传多样性与基因发掘利用研讨会论文集[C];2006年
7 陈刚;范玲玲;熊飞;戴绍军;孙国荣;;NaHCO_3胁迫下星星草根中Ca~(2+)与Ca~(2+)-ATPase的超微细胞化学定位研究[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 杨春雪;星星草(Puccinellia tenuiflora)解剖结构特征及重要物质组分变化与耐盐性关系研究[D];东北林业大学;2008年
2 郭立泉;星星草抗碱生理适应机制的研究[D];东北师范大学;2009年
3 王玉成;柽柳抗逆分子机理研究与相关基因的克隆[D];东北林业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘娟;星星草根对盐碱复合胁迫抗性的生理系列化整合机制研究[D];扬州大学;2009年
2 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
3 喻娟娟;星星草(Puccinellia tenuiflora)叶片盐胁迫应答蛋白质组学研究[D];东北林业大学;2011年
4 张丽辉;松嫩平原两种生境星星草种群构件的数量特征[D];东北师范大学;2006年
5 聂玉哲;星星草耐盐碱基因的分离及相关基因群的芯片分析[D];东北林业大学;2006年
6 闫丽侠;火烧对松嫩草地星星草株丛数量性状及其相互关系的影响[D];东北师范大学;2010年
7 庄晓冬;松嫩平原碱化草地星星草无性系构件表型可塑性[D];东北师范大学;2009年
8 王思宁;星星草(Puccinellia tenuiflora)愈伤组织盐胁迫应答蛋白质分析[D];哈尔滨师范大学;2013年
9 褚延广;星星草耐盐分子机理研究及相关基因的克隆[D];东北林业大学;2005年
10 杨亚军;盐胁迫和碱胁迫对星星草体内柠檬酸代谢相关酶活性的影响[D];东北师范大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 文/小黑;治盐碱先锋植物——星星草[N];山西科技报;2001年
2 赵子瑞;优质牧草——星星草[N];湖北科技报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978