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东北虎(Panthera tigris altaica)电刺激采精及冻融前后精子超微结构研究

刘洋  
【摘要】: 东北虎(Panthera tigris altaica)是国家一级保护动物,我国现存野生东北虎的数量很少,而人工圈养的东北虎又存在近亲繁殖的现象。对东北虎的精液进行超低温冷冻保存研究,为将来建立精液的种质资源库,通过人工授精在圈养虎和野生虎之间进行基因交流,避免近亲繁殖造成的种群退化,增加虎基因的多样性,对于更加有效的保护东北虎具有十分重要的意义。 本研究对17只东北虎进行了23次电刺激采精,并对取得精液进行品质分析。结果表明,不同虎个体对电刺激采精的电压敏感度不同,在平均电压为4.78±1.3伏时射精。所采集精液量平均为4.02±1.18mL,pH值为7.05±0.26,精子密度为23.43±33.87×10~6个/mL,精子活率为62.9±19.96%,畸形率为45.06±14.96%。从总体上看12月份和1月份采精效果最好,有精率占全年的57.2%,10月和11月的采精效果最差,无精率占全年的44.4%,表明东北虎精液品质受季节影响。 通过比较果糖和葡萄糖两种冷冻稀释液对精子的保护情况,发现果糖冷冻稀释液对虎精子的保护效果较好,冻融后精子活率达到58.85%,畸形率为58.88±11.88%,顶体完整率为82.43±4.04%;葡萄糖冷冻稀释液,解冻后精子活率为13.83%,畸形率为63.1±1.7%,顶体完整率为83.1±8.3%。 用扫描电镜和透射电镜对东北虎精子形态和结构的观察表明,东北虎精子全长52.57±1.25μm,可分为头部和尾部。在头部和尾部颈段处及尾部中段前方常见原生质滴,内含线粒体。头部:正面呈圆形长约为3.98±0.58μm;宽约3.41±0.59μm。颈段:颈段是连接头部和尾部的结构,颈段较短0.66±0.106μm,内含中心粒和节柱。中段:长8.627±1.166μm,由线粒体包围,线粒体为31-34旋,轴丝为常见的“9+2”结构。主段和末段长39.31±1.25μm。 冷冻对于精子损伤主要表现在质膜和线粒体,而这些变化会在不同程度上引起受精率的下降。精子在冻融过程中质膜易发生膨胀或断裂、顶体囊泡化或溃散,而质膜和顶体丢失现象较少。可见,冷冻保护液只能一定程度的保护精子,冷冻对于精子的损伤是不可避免的。


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