收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠和Aβ损伤PC12细胞的保护作用研究

崔悦  
【摘要】:目的:根据实验室的前期研究,骨碎补总黄酮在治疗AD上可作为有效部位,并且紫云英苷和圣草酚是骨碎补总黄酮中含量较高的两种有效成分。本实验将以骨碎补提取物对记忆障碍模型小鼠的学习认知记忆能力的影响及机制进行研究,并探究骨碎补总黄酮中主要成分紫云英苷及圣草酚对Aβ_(25-35)诱导损伤PC12细胞的影响及其机制,为明确补肾中药骨碎补预防及治疗阿尔茨海默病作用机制奠定实验基础。方法:动物实验:将骨碎补提取物灌胃给予东莨菪碱和亚硝酸钠建立两种学习记忆障碍小鼠模型,观察骨碎补提取物对模型小鼠的学习记忆改善作用。将14周的昆明小鼠按体重随机分组,分为空白组、模型组、阳性对照组、骨碎补提取物组和骨碎补提取物+ER阻断剂组。采用新物体识别、Morris水迷宫、跳台实验观察小鼠的记忆及判断能力;采用HE染色、透射电镜和免疫组化方法观察小鼠海马及下丘脑区的病理改变,小鼠海马区ERβ及下丘脑区ERα的表达;采用Western Blot法检测海马中ERβ、P-P38/P38蛋白含量及Aβ代谢相关指标、Tau蛋白磷酸化相关指标、凋亡系统相关指标的蛋白含量;试剂盒法检测海马中乙酰胆碱系统及氧化应激系统中相关蛋白含量。细胞实验:将紫云英苷及圣草酚分别作用于Aβ_(25-35)诱导损伤的PC12细胞,采用MTT法检测细胞存活率;Western Blot方法检测细胞ERβ、P-P38/P38、Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量。再进一步给予ER阻断剂ICI182780、P38/MAPK阻断剂SB203580后,检测对紫云英苷及圣草酚作用的变化,深入研究ER-P38/MAPK信号通路是否参与了紫云英苷或圣草酚对Aβ_(25-35)损伤PC12细胞的保护作用。结果:动物实验结果新物体识别实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的新物体识别指数显著增加(P0.01);水迷宫实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的逃避潜伏期显著缩短(P0.01),平台穿越次数及靶象限停留时间显著增加(P0.01);跳台实验结果表明,在给予骨碎补提取物后模型小鼠的错误次数、潜伏期显著缩短(P0.01);上述作用均能被ER阻断剂ICI182780逆转,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。HE染色实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,海马区神经元排列较为紧密且数量较多,形态正常,没有明显核固缩现象;电镜实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,神经毡区突触小泡数量明显增多,细胞双层核膜清晰、核仁明显。免疫组织化学实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,显著增加两种记忆障碍模型小鼠海马区ERβ的表达及下丘脑区ERα的表达(P0.01);上述作用均能被ER阻断剂ICI182780逆转,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。Western Blot实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,骨碎补提取物组小鼠海马区ERβ、NMDAR1、GluR2和Bcl-2的表达显著增加(P0.01),P-P38/P38、APP、BACE1、P-Tau~(396)、CDK5、CAMKⅡ、Bad和Caspase-3的表达显著降低(P0.01);骨碎补提取物组给予ER阻断剂后,转变了以上蛋白含量的变化;试剂盒法实验结果表明,两种记忆障碍模型小鼠给予骨碎补提取物后,骨碎补提取物组小鼠海马区Ach含量和ChAT的活性在给予骨碎补提取物后显著提高,AchE、MDA及NO活性显著降低(P0.01),骨碎补提取物组给予ER阻断剂后转变以上蛋白的变化,说明骨碎补提取物可通过ER通路介导对模型小鼠发挥保护作用。细胞实验结果MTT结果显示,Aβ_(25-35)组细胞增殖率显著降低(P0.01);圣草酚及紫云英苷组细胞增殖率显著升高(P0.01),给予ER阻断剂、P38阻断剂后阻断了圣草酚及紫云英苷组的上调作用(P0.01);Western blot结果显示,圣草酚及紫云英苷组ERβ和Bcl-2的表达显著增加(P0.01),P-P38/P38和Caspase-3的表达显著降低(P0.01);给予ER阻断剂后,ERβ和Bcl-2的表达显著减少(P0.01),P-P38/P38和Caspase-3的表达显著升高(P0.01);给予P38阻断剂后,Bcl-2的表达显著减少(P0.01),P-P38/P38和Caspase-3的表达显著升高(P0.01)。结论:骨碎补提取物能够通过ER-P38/MAPK信号通路调节两种记忆障碍模型小鼠的Aβ代谢系统、Tau蛋白磷酸化系统、乙酰胆碱系统、氧化应激系统、凋亡系统发挥神经保护作用;紫云英苷和圣草酚通过ER-P38/MAPK信号通路对Aβ_(25-35)诱导损伤的PC12细胞具有保护作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前11条
1 彭书浩;李慕勤;王晶彦;田钦文;;纯钛表面载骨碎补提取物涂层的制备与性能[J];稀有金属材料与工程;2019年06期
2 刘振丽;吕爱平;何孟德;;骨碎补提取物对Ⅱ型胶原免疫所致关节炎小鼠免疫功能的影响[J];中医杂志;1997年09期
3 李建民;王雷鸣;;骨碎补提取物对去卵巢骨质疏松大鼠血清学指标及疗效的影响研究[J];新中医;2019年09期
4 席昱;许婷婷;吴慧平;;骨碎补对α-糖苷酶活性的影响[J];中药新药与临床药理;2011年06期
5 吕勇均;邱宗荫;;中药骨碎补提取物质量标准研究[J];中国药业;2007年23期
6 李晓红;熊志立;卢姗;张轶;李发美;;液质联用研究骨碎补提取物给予大鼠后柚皮苷及其代谢物柚皮素的药动学行为(英文)[J];中国天然药物;2010年01期
7 檀龙颜;马洪娜;;骨碎补药理作用的研究进展[J];中国民族民间医药;2017年11期
8 杜娟;夏佳楠;沈丽;王元元;王亚苹;张德芹;;菟丝子、骨碎补提取物体外对酪氨酸酶活性的影响[J];天津中医药大学学报;2013年01期
9 刘国岩;徐展望;徐琬梨;;骨碎补提取物对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及CXCL12表达的影响及意义[J];中华中医药杂志;2013年05期
10 陈瑶;刘忠良;赵勇;;骨碎补化学成分和药理作用研究进展[J];解放军药学学报;2012年05期
11 刘国岩;徐展望;徐琬梨;张建新;刘彬;;骨碎补提取物对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化Cbfα-1表达的影响及意义[J];中国骨质疏松杂志;2013年12期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 刘国岩;徐展望;徐琬梨;;骨碎补提取物对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及CXCL12表达的影响及意义[A];第四届全国中医药博士生优秀论文专辑[C];2013年
2 孙俊毅;刘瑾;李昂;杨冬梅;李珏丹;石建峰;苟建重;;中药复方连补缓释凝胶制剂的毒理学研究[A];2018年中华口腔医学会第十次全国口腔黏膜病学术大会暨第八次全国口腔中西医结合学术大会论文集[C];2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 崔悦;骨碎补提取物对两种记忆障碍模型小鼠和Aβ损伤PC12细胞的保护作用研究[D];佳木斯大学;2019年
2 高明珠;中药骨碎补、熟地诱导骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞的研究[D];大连医科大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 通讯员 王莹 邓羽;14个创新基金项目获省立项[N];河北经济日报;2013年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978