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酸枣仁汤改善睡眠作用的药效物质基础研究

齐凤琴  
【摘要】:目的:利用中药血清药物化学的方法,确认酸枣仁汤改善睡眠作用的药效物质基础。 方法: 1、酸枣仁汤冻干粉中芒果苷和甘草苷的含量测定: 以芒果苷和甘草苷为对照品,采用HPLC-UV色谱法,分别在257nm和276nm波长下对酸枣仁汤冻干粉中芒果苷和甘草苷的含量进行测定。 2、酸枣仁汤冻干粉指纹图谱的建立: 本实验遵照国家药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的技术规定,采用HPLC-UV色谱法,确定酸枣仁汤的HPLC-UV色谱条件,测定十批样品,建立酸枣仁汤HPLC-UV指纹图谱。 3、酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠血中移行成分的分析: 选择Wistar大鼠,灌胃给予酸枣仁汤冻干粉,连续给药7天,以甲醇法除蛋白制备含药血清,在酸枣仁汤冻干粉指纹图谱色谱条件下,进行给药后血中移行成分的确认及药物来源的认定。 4、酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠脑脊液中移行成分的分析: 选择Wistar大鼠,灌胃给予酸枣仁汤冻干粉,连续给药7天,以甲醇法除蛋白制备含药脑脊液。在酸枣仁汤指纹图谱色谱条件下,进行给药后脑脊液中移行成分的分析。 5、酸枣仁汤改善睡眠作用药效物质基础的确认: 在酸枣仁汤冻干粉指纹图谱色谱条件下,对体外色谱图、给药后大鼠血中移行成分色谱图、脑脊液中移行成分色谱图进行对比分析,初步确认该方改善睡眠作用的药效物质基础。 6、脑脊液中内源性物质的初步认定: 在酸枣仁汤冻干粉指纹图谱色谱条件下,记录神经递质的HPLC色谱图,通过对比分析,确认脑脊液中内源性物质。 结果: 1、酸枣仁汤冻干粉中芒果苷和甘草苷的含量测定: 芒果苷含量为4.8091±0.1806mg/g,甘草苷含量为2.1259±0.0623mg/g。 2、酸枣仁汤冻干粉指纹图谱的建立:确定了酸枣仁汤冻干粉指纹图谱色谱条件—色谱柱:Waters公司Symmetry C18色谱柱;洗脱系统:乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱;流速:1ml/min:柱温:30℃;检测波长:280nm;进样量10μl;对10批样品进行了指纹图谱的测定,经HPLC-UV比对确定了11个共有峰的来源。 3、酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠血中移行成分的分析: 在酸枣仁汤冻干粉色谱条件下,给药七天后大鼠血中共检出6个移行成分,均为酸枣仁汤入血后产生的新生代谢产物。 其中,血中移行成分1、2由酸枣仁、甘草所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分3、4、5为甘草所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分6为酸枣仁和知母所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分4在单味药血清色谱图中未见体现,推测该移行成分不是由方中任何一个单味药产生,可能是复方煎煮过程中产生的新的化学成分入血后产生的新生代谢产物。 4、酸枣仁汤冻干粉给药后脑脊液中移行成分的分析: 酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠脑脊液中出现了某种内源性物质的升高,从峰面积看,给药组是空白组峰面积的近4倍。 5、酸枣仁汤改善睡眠作用药效物质基础的确认: 酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠血清中出现的6个移行成分有可能成为酸枣仁汤改善睡眠作用的药效物质基础。 6、脑脊液中内源性物质的初步认定: 通过与神经递质的比对,发现该内源性物质不是5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素、多巴胺、腺苷及尿苷中的任何一种,至于该成分为何种神经递质有待进一步研究。 结论: 1、酸枣仁汤冻干粉中芒果苷和甘草苷的含量测定: 酸枣仁汤冻干粉中芒果苷的含量应不低于4.8091±0.1806 mg/g,甘草苷的含量应不低于2.1259±0.0623mg/g。 2、酸枣仁汤冻干粉指纹图谱的建立 建立了酸枣仁汤冻干粉指纹图谱,在280nm下共确定了11个共有峰。1号峰来源于知母;2号峰来源酸枣仁;3号峰来源于知母;4号来源于酸枣仁;5、6号来源于甘草;7号峰来源于川芎;8号峰来源于酸枣仁和川芎;9号峰来源于川芎、甘草;10号峰来源于川芎;11号峰来源于甘草。 3、酸枣仁汤冻干粉给药后大鼠血中移行成分的分析: 在酸枣仁汤冻干粉色谱条件下,给药后大鼠血中共检出6个移行成分,均为酸枣仁汤入血后产生的新生代谢产物。 其中,血中移行成分1、2由酸枣仁、甘草所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分3、4、5为甘草所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分6为生药酸枣仁和知母所含成分入血而产生的代谢产物;血中移行成分4在单味药血中移行成分色谱图中未见体现,推测该移行成分不是由方中任何一个单味药产生,可能是复方煎煮过程中产生的新的化学成分入血后产生的新生代谢产物。 4、酸枣仁汤给药后大鼠脑脊液中移行成分的分析: 给药后脑脊液中,并未见体外成分的检出,而是出现了某种内源性物质的增高。推测酸枣仁汤改善睡眠作用机制可能是通过升高该内源性物质来实现的。 5、酸枣仁汤改善睡眠作用药效物质基础的初步确认: 酸枣仁汤给药后大鼠血中出现的6个移行成分有可能成为酸枣仁汤改善睡眠作用的药效物质基础。 6、脑脊液中内源性物质的初步认定: 通过与神经递质的比对,发现该内源性物质不是5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素、多巴胺、腺苷及尿苷中的任何一种,至于该成分为何种物质有待进一步研究。 上述研究结果将为酸枣仁汤作用机制的阐明及深层次的开发研究奠定实验基础。


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