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熊果酸和山奈酚对UVB损伤HaCaT细胞的保护作用及机制研究

杨锐  
【摘要】:目的:研究十精丸中山茱萸和菟丝子的活性成分熊果酸和山奈酚对紫外线(UVB)损伤人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用,探讨熊果酸和山奈酚对UVB损伤HaCaT细胞TNF-α、IL-6相关炎症因子以及JNK、P-JNK、AKT、P-AKT信号通路的影响与调控机制,为十精丸防治皮肤光老化提供理论依据。方法:1.选取对数生长期HaCaT细胞,用剂量为60mJ·cm-2的UVB辐射,建立光老化HaCaT模型。2.用MTT法检测HaCaT细胞的增殖率,筛选药物的安全浓度与有效浓度。3.筛选浓度后用10-1mol·L~(-1)的熊果酸和10-10mol·L~(-1)的山奈酚处理光老化HaCaT细胞24h,检测细胞中SOD活性及MDA含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中TNF-α、IL-6、AKT、P-AKT、JNK、P-JNK等相关指标的蛋白表达量。结果:1.倒置显微镜下观察细胞的形态,正常HaCaT细胞紧凑排列,边界清晰,而光老化HaCaT细胞间隙变大,形状不规则,边界模糊;2.MTT结果显示:当熊果酸浓度高于10-12mol·L~(-1)、山奈酚浓度高于l0-8mol·L~(-1)时会明显抑制正常HaCaT的增殖(P0.01或P0.05),而在安全浓度范围内,以浓度为10-14mol·L~(-1)的熊果酸和浓度为10-10mol·L~(-1)的山奈酚对光老化HaCaT的保护作用最明显(P0.01)。3.与空白组相比,模型组SOD的活性显著降低,MDA含量显著提高(P0.01);与模型组相比,浓度为10-14mol·L~(-1)的熊果酸和浓度为10-10mol·L~(-1)的山奈酚可以明显提高细胞内SOD活性,降低MDA含量(P0.01);与空白组相比,模型组TNF-α和IL-6的蛋白表达量以及P-AKT/AKT和P-JNK/JNK的比值显著升高(P0.01);与模型组相比,经过浓度为10-14mol·L~(-1)的熊果酸和浓度为10-10mol·L~(-1)的山奈龄预处理后的光老化HaCaT细胞TNF-α和IL-6的蛋白表达量以及P-AKT/AKT和P-JNK/JNK的比值显著降低(P0.01)。结论:熊果酸和山奈酚能够促进光老化HaCaT细胞的增殖,提高细胞SOD活力,降低MDA含量,抑制TNF-α、IL-6炎症因子的分泌同时下调磷酸化AKT和磷酸化JNK的表达,抑制JNK信号通路和AKT信号通路的激活,从而有效预防皮肤光老化的发生。


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