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抗支糖浆对CVA豚鼠模型Th17/Treg失衡的免疫调节机制研究

景伟超  
【摘要】:目的:基于伏痰理论探讨抗支糖浆对咳嗽变异性哮喘Th17/Treg失衡的免疫调节机制,为深入研究抗支糖浆作用机制及其临床推广应用提供依据。方法:将90只SPF级雄性豚鼠(体重260±15g)随机分为6组:空白对照组、模型组、地塞米松组、抗支糖浆高剂量组、抗支糖浆中剂量组、抗支糖浆低剂量组,每组15只,适应性饲养1周。除空白对照组外,其余各组于实验的第1天给予OVA及Al(OH)3注射致敏,实验第16天起,以OVA溶液雾化攻击,隔日1次,共14天。各给药组于实验的第15天起进行药物干预,每日1次,共14天。实验结束后,观察各组豚鼠模型体质量及咳嗽次数变化情况。末次雾化结束24小时内取材,瑞氏染色法检测BALF中细胞分类及计数变化;通过HE染色观察肺组织炎症情况;ELISA技术检测血清及肺泡灌洗液中Th17、Treg细胞相关细胞因子IL-6、IL-10、IL-17、IL-35 的水平;Western Blot 和 Real-time PCR 技术检测肺组织中 Th17、Treg细胞转录因子RORyt和Foxp3的蛋白及基因表达水平。结果:1.体质量变化:诱发CVA前各组豚鼠体质量无显著性差异(P0.05),反复诱发CVA后,其生长发育受到了一定的抑制。与模型组比较,空白对照组、抗支糖浆各剂量组体重增长有显著性差异(P0.05);与地塞米松组比较,抗支糖浆各剂量组体重增长明显(P0.05);模型组、地塞米松组体质量较空白对照组增长缓慢,两组之间比较无显著性差异(P0.05)。2.咳嗽次数变化:与空白对照组比较,模型组咳嗽次数明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组咳嗽次数明显减少(P0.05);与地塞米松组比较,抗支糖浆中、高剂量组无显著性差异(P0.05)。3.BALF中细胞分类与计数变化:与空白对照组相比,模型组BALF中白细胞总数、EOS、LYM的比例均有不同程度的增加(P0.05);EOS绝对计数明显增多(P0.05);MAC比例减少,无显著性差异(P0.05)。与模型组比较,各给药组BALF中白细胞总数、EOS绝对计数及EOS、LYM比例均有明显降低(P0.05),NEU比例增多(P0.05)。与地塞米松组比较,抗支糖浆中剂量组白细胞总数及其分类比例均无显著性差异(P0.05)。4.病理组织HE染色显示:模型组肺组织存在较多的炎性细胞,支气管管壁破坏、粘膜充血水肿;管腔内可见上皮细胞脱落及分泌物增多,并有粘液栓形成。与模型组比较,抗支糖浆各剂量组、地塞米松组上述病理变化明显减轻,分泌物明显减少。以地塞米松组和抗支糖浆中、高剂量组改善较明显。5.ELISA检测显示:与空白对照组比较,模型组BALF及血清中细胞因子IL-6、IL-17的含量明显升高,IL-10、IL-35的含量明显降低(P0.05);与模型组比较,地塞米松组、抗支糖浆各剂量组BALF及血清中IL-6、IL-17的水平明显降低,IL-10、IL-35的水平明显升高(P0.05);与地塞米松组比较,抗支糖浆中、高剂量组无显著性差异(P0.05)。6.WesternBlot检测结果显示:与空白对照组比较,模型组肺组织中RORyt蛋白表达明显增多,Foxp3蛋白表达下降(P0.05);与模型组比较,地塞米松组、抗支糖浆各剂量组肺组织中RORγt蛋白水平明显降低(P0.05),Foxp3蛋白表达水平升高(P0.05);与地塞米松组比较,抗支糖浆中、高剂量组无显著性差异(P0.05)。7.Real-timePCR检测结果显示:与空白对照组比较,模型组肺组织中RORyt的mRNA表达明显增多,Foxp3的mRNA表达下降(P0.05);与模型组比较,地塞米松组、抗支糖浆各剂量组肺组织中RORγt的mRNA表达水平明显降低(P0.05),Foxp3的mRNA表达水平升高(P0.05);与地塞米松组比较,抗支糖浆中、高剂量组无显著性差异(P0.05)。结论:1.抗支糖浆可以改善CVA豚鼠模型的体质量、咳嗽次数等一般状况,降低白细胞总数及EOS计数,减少粘膜下水肿及粘液的分泌,减轻气道炎性浸润,从而改善呼吸道高反应状态,改善症状。2.抗支糖浆可能通过降低CVA豚鼠模型BALF及血清中细胞因子IL-6、IL-17的水平,升高IL-10、IL-35的水平,从而起到抑制CVA气道炎症、调节Th17/Treg平衡失调的作用。3.抗支糖浆可能通过下调RORytmRNA及蛋白表达,上调CVA豚鼠模型肺组织中Foxp3mRNA及蛋白表达,从而起到调节Th1 7/Treg平衡失调的作用。


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