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苯磺隆、使它隆降解菌的分离鉴定及生长特性的初步研究

田方方  
【摘要】:我国是农业大国,调整种植结构、提高单位面积粮食产量和品质己成为当前农业生产的首要任务。随着农业生产技术水平的不断提高,除草剂己被广泛应用于农业生产当中,苯磺隆(Tribenuron-methyl)、使它隆(Fluroxypyr)是麦田常用的两种除草剂,由于其高效、快速、广谱、对作物安全、使用方便的特点而得到大面积推广使用。随着它们的大量应用暴露出了很多问题。农业耕作过程中所施用的除草剂仅有少部分被植物吸收,大部分残留在土壤中,对农业生态系统造成污染,进而影响人类健康,引起了人们的高度重视。因此,研究其污染的治理具有重要意义。 本文研究采用传统富集培养方法从多年施用苯磺隆、使它隆的麦田采集土样,分离筛选出一批对两种农药有降解作用的细菌菌株,它们能以除草剂为唯一碳源生长。4株苯磺隆降解菌分别命名为B1、B2、B3和B4;3株使它隆降解菌分别命名为S1、S2和S3。通过形态学观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析,B1鉴定为铜绿假单胞菌属(P. aeruginosa),B2和S1为戴尔福特菌属( Delftia sp. ),B3为微杆菌属( Microbacterium sp. ),B4为产碱菌属(Alcaligenes sp.)S2和S3沙雷氏菌属(Serratia sp.),其中S2被鉴定为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。 7株降解菌在pH6~pH9的范围内均可生长,菌株B3在pH8.0时生长最佳,菌株B1、B2、B4、S1、S2和S3以在pH7.0时生长最佳;在20℃~40℃的温度范围内均可生长,菌株B1最适温度为35℃,另六株菌最佳生长温度是30℃;除草剂浓度对菌株生长具有一定的影响,菌株B3和S2最适生长浓度为100mg/L,菌株B1、B2、B4、S1、和S3最适浓度均为200mg/L;装液量为25ml~150ml(250ml三角瓶)均可生长,通气量为3/10体积时菌株B1、B2、B3、B4和S1生长状况最好,而S2和S3则为2/5;接菌量在5%~20%菌株均可生长,菌株B2、B4、S1、S2和S3最适接菌量为10%,菌株B1和B3则为15%;在硝酸钠、硝酸铵、氯化铵和硫酸铵四种外加氮源中,硝酸铵对降解菌株生长最有利;葡萄糖、蔗糖与乳糖三种外加碳源,葡萄糖对降解菌株生长的促进作用更好;Mg2+浓度为50 mg/L~300 mg/L的范围内,菌株均可生长,以Mg2+浓度为100 mg/L时菌株B2和S1的生长最佳,菌株B1、B3、B4、S2和S3则以Mg2+浓度为100 mg/L为最适添加浓度;7株降解菌有不同的耐盐性,NaCl浓度为20g/L为菌株B1、B2最适盐度,菌株B2在5g/L~30g/L范围内生长量基本一致,菌株S1、S2和S3最适盐度则出现在30g/L,浓度提高到150g/L之后各菌株生长均受到明显抑制。 七株降解菌均具有良好的抗性。菌株B1对卡那霉素、氯霉素有抗性,菌株B2对四环素有抗性,菌株B3对氨苄青霉素、庆大霉素、红霉素有抗性,菌株B4在所有抗生素中均能生长,菌株S1对四环素有抗性,菌株S2对卡那霉素、链霉素有抗性,菌株S3对链霉素、氯霉素有抗性。


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