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自体富血小板血浆治疗大鼠脊髓损伤实验研究

余情  
【摘要】:[背景和目的]脊髓损伤是一种常见的、多发的疾病,主要是由于运动、高空坠落、交通事故、工伤等原因造成的。脊髓损伤是一种创伤性疾病,一旦发生将给患者带来终身痛苦,患者将会丧失部分或全部运动及感觉功能,从而瘫痪在床,丧失劳动能力,生活不能自理,给家庭及社会带来极大的负担。目前,脊髓损伤的发病率正随着社会的不断发展而上升,因此对损伤脊髓的修复研究也成为了现在世界各国研究的热点问题。主要的研究方向体现在以下几个方面:细胞移植和脊髓移植方面:如将嗅鞘细胞、雪旺氏细胞、神经干细胞、脐血干细胞、胎儿脊髓组织移植等来修复脊髓损伤;二、基因水平上的研究:通过抑制凋亡基因的表达从而抑制神经细胞的凋亡,保护受损脊髓组织;三、利用一些生物活性制剂如神经生长因子、激素以及促神经生长的药物等保护受损的神经组织,促进其再生;四、减少脊髓损伤区的疤痕形成;五、利用大网膜移植来恢复和重建受损伤脊髓的血运,促进其再生。以上的各种方法虽然都有一定的作用,但是距离完全修复受损伤脊髓,恢复原有运动及感觉功能的目标还有很长一段路要走,所以修复脊髓损伤的课题目前仍是各国研究的热点问题。本实验建立大鼠急性脊髓压迫损伤模型,采用自体富血小板血浆直接注入到大鼠损伤脊髓处,通过病理切片观察、诱发电位、斜板试验、BBB量表、免疫组化、计算机图形处理、western-blot等技术观察自体富血小板血浆对脊髓损伤大鼠神经功能恢复、损伤脊髓处神经纤维穿越胶质瘢痕能力及神经营养因子BDNF表达的影响。 [方法]SD大鼠,全部为雄性,按实验需要根据随机数字表法随机分为PRP治疗组(A组)、对照组(B组)。两组均采用眶后采血方法采血2ml,A组血样采用改良Appel法制取PRP,B组血样制取自体血浆,即用冷冻离心机在220g离心力作用下离心20分钟,取上清液,将上清液在480g的离心力作用下离心20分钟,下面的沉淀为血小板,上清液为血浆,放入4℃冰箱冷冻备用。两组均用盐酸氯胺酮100mg/kg+盐酸甲苯噻嗪25mg/kg腹腔注射将大鼠全身麻醉,采用改良Nystrom法后路压迫大鼠胸段脊髓。A组大鼠在脊髓损伤后立即在伤处滴入PRP、B组在脊髓损伤后立即在伤处滴入自体血浆,均浸泡5min后逐层缝合伤口。各只大鼠分别在术后进行如下研究:①采用斜板试验观察大鼠后肢运动功能恢复情况;②BBB运动功能评分;③HE染色观测伤段脊髓并计算残存脊髓组织面积;④体感诱发电位(SSEP);⑤免疫荧光双标法检测两大类神经轴突(降钙素基因相关蛋白(calcitonin gene-related peptide CGRP)阳性及5-羟色胺能神经纤维穿越胶质瘢痕情况;⑥western-blot法检测脊髓中神经营养因子NGF、BDNF表达的变化。 [结果]①大鼠脊髓损伤后第7、14天,A组后肢运动功能评分明显高于B组,两者间差别有统计学意义(P0.05)。SSEP潜伏期及波幅值变化:术后第14天A组潜伏期12.37±1.689ms、波幅0.54±0.056mv;B组潜伏期14.14±1.553ms、波幅0.32±0.031mv,两组差别有统计学意义(P0.05);②伤后第14天A组伤段残存脊髓组织面积大于对照组(P<0.05)。脊髓损伤处远侧端神经轴突出现的平均百分比为:5-HT能神经轴突A组40.2±4.98%、B组28.3±3.22%,CGRP能神经轴突A组58.3±4.23%、B组43.2±3.26%,两组差别有均有统计学意义(P0.05)。CGRP组与5-HT组相比,两对照组差别无显著性(P0.05,),两实验组差别有统计学意义,CGRP组穿越情况明显高于5-HT组(P<0.05);③术后第3、7、14天,A、B组的NGF、BDNF蛋白表达均呈上升趋势,术后第7天及14天A组NGF及BDNF的表达量均高于B组(P0.05)。 [结论]自体富血小板血浆治疗对大鼠实验性脊髓损伤的修复有明显的促进作用。


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