收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表达结核杆菌融合抗原的重组酿酒酵母免疫效果研究

江佳稀  
【摘要】:近年来结核病疫情严重,造成很大危害。疫苗是防治结核病最有效手段。卡介苗(BCG)是唯一得到批准并广泛使用的结核疫苗,但它的保护效果有限而且保护效果随着时间的增加而减弱。因此,开发研制更有效的结核疫苗十分迫切。 目前正在研制的结核病疫苗主要有亚单位疫苗和活菌疫苗等,其中多个疫苗已进入临床试验阶段。近年出现了一种新的疫苗形式:重组酿酒酵母疫苗。重组酿酒酵母具有治疗性疫苗潜能,在防治丙型肝炎、结肠癌等传染病和肿瘤方面的应用研究取得了令人嘱目的进展。 本研究以结核杆菌重要保护抗原Ag85B, ESAT-6为对象,利用本实验室具有自主知识产权的pHR酿酒酵母表达系统,分别构建了表达融合抗原Interferon-y-ESAT-6-Ag85B (IEA)和ESAT-6-Ag85B(EA)的重组酿酒酵母工程菌Y16/pHR-PAG-IEA (Yeast-IEA)和Y16/pHR-PAG-EA (Yeast-EA)。ELISA证实Yeast-IEA和Yeast-EA有效表达融合抗原IEA和EA。 将热失活的重组酵母以皮下注射方式免疫C57/BL6小鼠,研究重组酿酒酵母免疫后对小鼠体液免疫、细胞免疫反应的影响,利用BCG攻击保护模型检测重组酵母疫苗对小鼠的保护作用。主要研究结果如下 (1)表达结核杆菌抗原的重组酵母能够刺激小鼠产生Ag85B特异性抗体IgG,随着免疫次数增加IgG效价明显提高,4周时Yeast-IEA给小鼠IgG效价显著高于Yeast-EA组和BCG组小鼠,对照PBS组和酿酒酵母Y16组小鼠无Ag85B特异性抗体产生。而且随着免疫次数增加,不仅IgG2a、IgG1水平提高,而且IgG2a/IgG1比值也明显增加。免疫4周时Yeast-IEA组IgG2a/IgG1比值显著高于Yeast-EA组和BCG组小鼠。上述结果说明重组酿酒酵母免疫后能够有效刺激小鼠的体液免疫反应,相对于融合抗原EA和BCG,融合抗原IEA更有利于激发小鼠免疫系统Thl型反应。 (2) ELISA检测结果显示重组酵母能够刺激小鼠产生IFN-γ、IL-2,对IL-4没有什么影响,其中Yeast-IEA免疫小鼠IFN-γIL-2显著高于Yeast-EA组和对照BCG组小鼠。与此对应地,流式细胞术检测结果显示Yeast-IEA组小鼠脾细胞中胞内产生IFN-γ或者IL-2的CD4+T淋巴细胞比例明显高于Yeast-EA组和对照BCG组小鼠。说明重组酵母能够刺激小鼠Th1型细胞免疫反应,与Yeast-EA相比,Yeast-IEA的刺激效果更强烈。 (3)重组酵母能够刺激小鼠抗原递呈细胞--树突状细胞(dendritic cell)成熟分化。重组酵母免疫小鼠脾细胞中CD80、CD86、MHC I、MHCII阳性树突状细胞比例明显增加。体外实验也证实酵母与脾脏分离的树突状细胞直接接触作用,导致成熟树突状细胞比例大幅提升。 (4)重组酵母免疫对小鼠感染分支杆菌BCG具有一定保护作用。小鼠经尾静脉大剂量注射BCG,与对照组相比,预先免疫了重组酵母的小鼠肺和脾脏部位感染的细菌数大幅度降低,说明重组酿酒酵母疫苗能够一定程度保护小鼠。 上述研究结果表明,表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母皮下注射免疫可以激活小鼠体液免疫和细胞免疫系统,并能够降低分支杆菌感染效率。这些结果为其发展成为新型结核病防治疫苗奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陆小敏;裂裥菌素的免疫活性[J];国外医学.药学分册;1981年05期
2 成光杰,徐海明,谢慎思,彭兴华,朱定尔;结核杆菌异烟肼耐药性产生的分子机制研究[J];湖南医科大学学报;1996年06期
3 李妙羡,王香玲;不同的标本处理方法对PCR检测结核杆菌的影响[J];陕西医学检验;1997年03期
4 闫国蕊,腊胜明;四种结核杆菌DNA提取方法PCR检测结果对比分析[J];中国防痨杂志;1998年02期
5 ;世界卫生组织呼吁防止抗药结核杆菌蔓延[J];世界科技研究与发展;2000年S1期
6 周彦君;;几种化验检查对结核性腹膜炎的诊断价值[J];检验医学与临床;2007年12期
7 王绪玲;廖培元;蒋光霞;王霞;;112例肺结核病人痰中结核杆菌的检测及结果分析[J];医学检验与临床;2008年01期
8 夏兴洲;;肠结核临床分析[J];医药论坛杂志;2008年19期
9 吴勤学;;关于麻风杆菌和结核杆菌悬液的计数:比较三种染色方法[J];国际皮肤性病学杂志;1982年02期
10 吴霁棠;;从纪念郭霍发现结核杆菌一百周年想到的[J];中国防痨杂志;1982年01期
11 陈贵连;荧光染色法对脏器中结核杆菌的检验效果观察[J];中国人兽共患病杂志;1987年03期
12 徐日基;张齿;;年轻人肺结核与肺癌并存的X线诊断(附7例报告)[J];医学影像学杂志;1992年01期
13 丁晓华,杨平,刘薇茜,谭云,赵文先,蔡建斌,梅国华,潘慧可;PCR 扩增人型结核杆菌 DNA 及结核杆菌属 DNA 探针的制备[J];生物化学与生物物理进展;1993年03期
14 姚娟,金庆文,侯熙德,赵中,王宁山,陈荣;结核杆菌DNA三种快速提取方法评价[J];临床检验杂志;1994年04期
15 李宁,涂平,朱学骏;聚合酶链反应检测颜面播散粟粒狼疮皮损内结核杆菌DNA[J];中华皮肤科杂志;1995年02期
16 郭津津,郭兑山,康颖华,王冬梅;应用多重聚合酶链反应和Bactec 460 TB 系统检测结核杆菌比较[J];中华微生物学和免疫学杂志;1995年06期
17 李国利,庄玉辉,张晓刚,吴雪琼;聚合酶链反应检测肺结核患者外周血中结核杆菌的临床应用价值[J];中华结核和呼吸杂志;1995年06期
18 王海英,左芸,邵建邦;BACTEC 460 TB仪器和罗氏培养基培养结核杆菌的比较[J];临床检验杂志;1996年03期
19 潘福娟,崔吉,郑奇;PCR检测结核杆菌DNA的临床应用[J];中国优生与遗传杂志;1996年05期
20 许梅,冯端兴,罗振元,张小润,张湘燕,李云;聚合酶链反应(PCR)对诊断结核性胸腔积液的价值[J];贵州医药;1997年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张瑞军;杨亮;魏海明;田志刚;;NK细胞参与γδT细胞对结核杆菌的特异免疫应答的调节[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
2 吴健;;浅谈痰涂片检查结核杆菌与质量控制[A];中国防痨杂志2003第25卷增刊——2003年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2003年
3 王旸;肖春玲;;异柠檬酸裂解酶——抗结核药物的新靶点[A];创新药物及新品种研究、开发学术研讨会论文集[C];2006年
4 王珂;;浅谈肺结核病人痰液的处理[A];河南省护理学会医院感染研究及进展高级研讨会暨护士长培训班资料汇编[C];2006年
5 陈东进;李洪敏;姜平;王巍;冯柏;王仲元;王国杨;;煤工尘肺结核耐药菌的基因分析(摘要)[A];中华医学会结核病学分会2002年学术会议论文汇编[C];2002年
6 李自慧;杜博平;贾红彦;邢爱英;陈曦;刘忠泉;郑晓静;曹廷明;刘洋;黄银霞;杜凤娇;张宗德;;结核分枝杆菌体内诱导基因的初步验证[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
7 戴红政;毛启龙;杨红梅;昌增益;;对结核杆菌小分子量热休克蛋白Hsp16.3高度保守疏水序列的定点突变研究[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年
8 倪正义;熊建刚;凡毅;;丁胺卡那与卡那霉素对结核杆菌的交叉耐药情况分析(摘要)[A];中华医学会第六届全国结核病学术大会论文汇编[C];2000年
9 王庆;孙道霞;唐荷英;刘晓云;;安徽省结核杆菌药物敏感性试验结果分析[A];中国防痨杂志2003第25卷增刊——2003年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2003年
10 王春林;朱立新;刘晶;汪垣;李光地;;表达HBV和HCV融合抗原的CHO细胞系的构建和鉴定[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙立;早期诊断结核杆菌相关肾损伤的实验性研究[D];中国医科大学;2010年
2 赵全民;抗结核杆菌有效中药筛选及蛇床子对结核杆菌分子表达影响的研究[D];吉林农业大学;2011年
3 姚万红;蛋白转导结核DNA疫苗的实验研究[D];武汉大学;2009年
4 宗金宝;加强型人乳头瘤病毒16型mE7/HSP70 DNA疫苗的实验研究[D];中国协和医科大学;2008年
5 宋兰英;结核杆菌感染与肺结核相关肺癌FHIT基因缺失的研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
6 张国畅;利用代谢工程、辅酶工程及酶工程构建重组酿酒酵母木糖利用菌株以生产乙醇的研究[D];天津大学;2012年
7 韩刚;抗前列腺癌异种化PSCA融合抗原DNA疫苗实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
8 王春雨;结核杆菌Taqman PCR检测方法建立及吉林省鹿结核杆菌MLVA分型研究[D];吉林农业大学;2011年
9 梁增伟;HBsAg与结核杆菌HSP70融合乙型肝炎DNA疫苗的基础研究[D];重庆医科大学;2001年
10 张亮;新型可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的抑瘤活性及免疫学机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 江佳稀;表达结核杆菌融合抗原的重组酿酒酵母免疫效果研究[D];复旦大学;2010年
2 全艳彩;重组酿酒酵母利用纤维素发酵乙醇的代谢工程研究[D];暨南大学;2010年
3 胡佳;重组酿酒酵母共培养直接发酵蔗渣产乙醇的统合生物工艺研究[D];暨南大学;2012年
4 杜蓬;荧光微球技术在结核杆菌耐利福平菌株rpoB基因突变多重检测中的应用研究[D];西北大学;2002年
5 龙洋;结核分枝杆菌PE家族蛋白质Rv1818c羧基端PGRS片段免疫功能的研究[D];四川大学;2004年
6 蒋青桃;结核杆菌ESAT-6抗原Th1型表位与FL重组DNA疫苗免疫效果及其保护作用的研究[D];南京医科大学;2011年
7 吴俊英;辅助信号在结核杆菌低分子多肽体外激活人外周血γδT细胞中的作用[D];苏州大学;2002年
8 王长永;分泌表达结核分枝杆菌Ag85B蛋白的重组卡介苗的构建和免疫学特性的初步研究[D];吉林大学;2008年
9 李春雷;构建重组酿酒酵母发酵木糖生产乙醇的研究[D];南京医科大学;2011年
10 刘静;急性中枢神经系统感染性疾病中病原体抗原联合检测方法的研究[D];河北医科大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐冠杰;耳鼻咽喉也会患结核[N];家庭医生报;2007年
2 王有国;结核杆菌自述(接上期)[N];家庭医生报;2006年
3 黄显斌;城市居民当心感染结核病[N];健康报;2006年
4 邱吉芬;女性尿频或许已肾结核[N];保健时报;2005年
5 实习生 孟刚;结核病高发需警惕[N];中国消费者报;2006年
6 唐逸;结核菌变身又成人类强敌[N];北京科技报;2008年
7 王佃鹏高朝贤;国境口岸预警检测再添技术支持[N];中国国门时报;2007年
8 云南中医学院教授 金建民;谈谈肺结核的治疗[N];云南日报;2000年
9 黄显斌;我国结核病防治形势严峻[N];中国医药报;2007年
10 本报记者 白轶南;结核病魔呼啸而来早诊治遏制嚣张气焰[N];保健时报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978