收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

端粒酶在肾脏的表达及其在肾脏缺血再灌注损伤修复过程中的作用研究

宋捷  
【摘要】:目的:端粒酶可以维持端粒体长度,防止细胞衰老,在胚胎干细胞中高度表达,但除部分成体干细胞(如造血干细胞)外,成年体细胞内几乎已无端粒酶的表达。我们利用已报道的端粒酶基因启动的GFP转基因鼠(mTert-GFP)研究端粒酶阳性细胞在肾脏的表达和肾损伤后变化,并求证端粒酶阳性表达能否成为肾脏成体干细胞的标志,进一步明确急性肾损伤修复的机制,以寻求指导急性肾损伤治疗的理论基础。 方法:(一)利用mTert-GFP转基因小鼠,通过肾小管标记物(AQP1、AQP2、THP、DBA及NKCC2等)和肾间质细胞标志物(F4/80、CD31、NG2及PDGFR-beta等)荧光共染定位端粒酶阳性细胞(GFP+);通过real-time PCR和TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol) PCR Elisa定量检测端粒酶基因和酶活性;(二)给新生mTert-GFP小鼠腹腔注射BrdU标记S期细胞,待8周成年后处死,仍保留BrdU标记的细胞为进入缓慢细胞周期的细胞Label-retaining Cells (LRC),观察并计数;(三)10周龄雄性FVB小鼠24只,夹闭双侧肾动脉30min,再通,制作小鼠双侧肾动脉缺血再灌注损伤(I/R)模型,分为假手术组(sham)、术后1天、2天、3天共4组,每组6只,分别取肾标本,同样用PCR和TRAP法检测肾损伤修复过程中端粒酶基因和酶活性的变化;(四)利用mTert-GFP转基因小鼠,建立单侧肾脏I/R模型,并在术后肾损伤再修复过程中不同时间点观察mTert-GFP再生情况;(五)利用mTert-CreERt2; R26LacZ两种转基因小鼠,通过谱系追踪和细胞周期标记研究肾缺血再灌注损伤修复过程中mTert细胞的再生和迁移。 结果:(一)生理状态下,端粒酶基因主要表达在成年小鼠肾脏乳头和内髓部位,保持较高的酶活性。成年mTert-GFP转基因小鼠的肾脏mTert表达与GFP保持一致,端粒酶主要表达于集合管和髓袢的小管上皮细胞(即AQP1、AQP2、THP、NKCC2阳性的小管),而在近曲小管和间质没有表达。(二)观察BrdU标记的肾乳头,16.7%的细胞长期保留BrdU标记,仅5%GFP+细胞仍有BrdU标记,视为进入慢细胞周期的LRC,这些细胞也散在分布于集合管和髓袢。(三)mTert基因于肾损伤后48h在肾乳头的表达明显上调,有统计学意义(P0.05),但在髓质和皮质的表达无显著变化。双侧肾损伤后24h和48h,肾乳头处端粒酶活性也显著升高,有统计学意义(P0.05)。(四)为证明急性肾损伤后端粒酶阳性细胞的作用,IRI刺激后24h、48h和72h分别给予BrdU,发现仅0.3%-0.5%的GFP+细胞增殖,且损伤最严重的外髓和皮质未出现GFP+细胞显著增加。(五)为追踪mTert+上皮细胞在工/R后的命运,术前一周给成年mTert-CreERt2; R26LacZ鼠单剂tamoxifen,术后连续5天给予BrdU,发现mTert-LacZ细胞未出现明显增殖和迁移,mTert+细胞也并未标记BrdU。 结论:本研究首次报道了端粒酶在成年小鼠肾脏中的表达主要集中于肾乳头和内髓,定位于肾脏集合管和髓袢上皮细胞。在急性肾损伤时端粒酶活性和基因表达均上调,可能对肾脏有保护作用,但表达端粒酶的细胞并未明显增生,参与损伤后修复。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 那宇;高月花;韦加美;;急性肾损伤分期及生物标志物[J];诊断学理论与实践;2011年03期
2 卜珊珊;尹忠诚;李红梅;李胜开;张颖;;尿胱抑素C评估腹腔镜气腹肾脏影响的价值[J];江苏医药;2011年16期
3 邓昕;;胃药可能是肾脏“杀手”[J];健康天地;2011年08期
4 杨志忠;毛健;段荣;;药物相关性急性肾损伤76例分析[J];中国临床药理学杂志;2011年08期
5 王继贵;;急性肾损伤早期检测的进展[J];实验与检验医学;2011年03期
6 ;饮食方略[J];健身科学;2011年07期
7 陈素贤;李才;于晓艳;石艳;;尾加压素Ⅱ及其受体在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达[J];中国病理生理杂志;2011年07期
8 李喜;金光玉;;多发性肾周脂肪肉瘤1例[J];中国医学影像技术;2011年08期
9 刘毅;;自发性肾破裂8例诊疗体会[J];求医问药(下半月);2011年03期
10 陈伟锦;;黄芪注射液治疗甘露醇致急性肾损伤的疗效观察[J];海南医学院学报;2011年08期
11 张世蔚;;调养身体勿忘护肾[J];家庭医学;2011年07期
12 陈基炜;陆振华;张顺东;;肾脏滤过重吸收功能电路模型的设计[J];医疗装备;2011年09期
13 林日阳;何立群;;解剖学的肾脏与藏象理论中的“肾”[J];中医杂志;2011年18期
14 卢晓月;鲁新;赵毓敏;赵外欧;;肾综合征出血热并发急性肾衰竭分析[J];当代医学;2011年19期
15 孙友文;宣强;周林玉;诸禹平;;肾脏髓外造血组织瘤样增生1例报道并文献复习[J];安徽医药;2011年09期
16 杨海;;原发性肾病综合征并发急性肾损伤的相关因素分析[J];实用预防医学;2011年07期
17 李博;韩学卫;郑亚莉;;多器官功能障碍综合征合并急性肾损伤的临床研究[J];宁夏医学杂志;2011年08期
18 王志祥;王春霞;刘拴虎;施继红;涂艳阳;;急性有机磷农药中毒患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的改变及临床意义[J];现代预防医学;2011年18期
19 李军辉;邢涛;汪年松;;急性肾损伤与妊娠关系的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年07期
20 魏芳;;四个累及肾脏的“危险分子”[J];健康天地;2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 潘秀贤;;肌酐、尿素与胱抑素C在甘露醇致急性肾损伤中的变化分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
2 汤耀卿;;急性肾损伤患者的液体管理[A];重症医学——2011[C];2011年
3 吴光华;戴再友;李云生;林曦;;莲必治致急性肾损伤1例[A];全国第二届中医中西医结合肾脏病临床进展学术研讨会论文集[C];2007年
4 段绍斌;刘庆;周巧艳;潘鹏;李英娟;邹琴;凌光辉;李军;彭佑铭;刘伏友;;腹膜透析在急性肾损伤治疗中的应用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
5 张玉想;;AKI的RIFLE与AKIN标准:有何差异[A];中国危重病医学大会-2011暨北京医学会重症医学年会汇编[C];2011年
6 李雪梅;;药物导致的急性肾损伤[A];中华医学会肾脏病学分会2010学术年会专题讲座汇编[C];2010年
7 钱家麒;;急性肾损伤[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年
8 毛海萍;;急性肾损伤的新概念和分期[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会专题讲座[C];2006年
9 段绍斌;汪翩;刘芳;许向青;王予慧;刘伏友;凌光辉;李瑛;;增龄对大鼠碘造影剂急性肾损伤的作用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
10 胡家昌;王瑞兰;俞康龙;李艳辉;;MODS患者急性肾损伤相关临床因素探讨[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋捷;端粒酶在肾脏的表达及其在肾脏缺血再灌注损伤修复过程中的作用研究[D];复旦大学;2011年
2 武志峰;磁共振弥散成像在肾脏中的应用[D];四川大学;2005年
3 袁莉;VEGF基因转染促进人早胚间充质干细胞修复急性肾损伤的作用研究[D];第二军医大学;2010年
4 韩国锋;α-MSH、EPO减轻横纹肌溶解大鼠急性肾损伤和心脏术后AKI的临床研究[D];复旦大学;2009年
5 裴华颖;Wnt/β-catenin信号通路在急性肾损伤修复过程中作用机制的研究[D];河北医科大学;2011年
6 林洪丽;人TIMP-1基因克隆、体外肾脏细胞基因转导、转基因小鼠建立及其肾脏表型变化[D];军医进修学院;2001年
7 席春生;调控纤维蛋白水平对不同鼠龄肾脏炎症反应的影响及其机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
8 张雪光;TIMP-1通过炎症途径促进衰老相关肾脏纤维化的机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
9 曹军英;有机磷类化合物中毒所致肝肾损害的超声影像学研究[D];第二军医大学;2005年
10 马淑然;中医学肾脏调控理论探讨及“肾应冬”调控机制的分子生物学实验研究[D];北京中医药大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈光耀;他克莫司对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其对热休克蛋白表达的影响研究[D];浙江大学;2005年
2 胡志娟;Smad4,7在糖尿病大鼠肾脏的表达和定位及药物对其影响的研究[D];河北医科大学;2005年
3 蔡秋程;大鼠胰肾联合移植的研究[D];福建医科大学;2005年
4 荣琳琳;低氧通过p38丝裂素激活蛋白激酶途径刺激人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子[D];第一军医大学;2005年
5 丁新民;一、钬激光对兔肾脏实质的生物学效应  二、三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞作用机制的实验研究[D];第四军医大学;2005年
6 张丽;ARDS大鼠心脏、肾脏Gq/11蛋白动态变化及异丙酚预处理研究[D];新疆医科大学;2005年
7 梁额尔敦;骨桥蛋白在氟中毒肾损害发生机制中的作用[D];吉林大学;2006年
8 毕晋明;超量添加吡啶甲酸铬对猪细胞DNA的影响[D];西北农林科技大学;2007年
9 那新雨;经腹腔途径腹腔镜治疗肾盂旁囊肿9例[D];浙江大学;2009年
10 张涛;茶多酚抗肾脏缺血再灌注损伤作用的实验研究[D];大连医科大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈昌来;肾脏有病不轻言[N];大众卫生报;2005年
2 省儿童医院 李志辉;保护小肾脏 家长要“多心”[N];大众卫生报;2009年
3 徐晓羽 本报记者 张晓祺;保护肾脏从点滴做起[N];解放军报;2009年
4 高坤;你会保养肾脏吗[N];中国中医药报;2009年
5 北京大学第一医院肾内科主治医师 王芳;如何判断肾脏健康[N];北京科技报;2009年
6 记者 于菲;三步清洗肾脏[N];医药养生保健报;2009年
7 陈锦屏 胥志跃;肾脏有病不“吭声”[N];大众卫生报;2009年
8 记者 唐闻佳;两成急性肾损伤源自乱吃药[N];文汇报;2011年
9 刘霞;英用干细胞培育出人体肾脏[N];科技日报;2011年
10 本报记者 张旭永;血压与肾脏健康密切相关[N];营口日报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978