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尿中邻苯二甲酸酯代谢物检测方法的建立及应用

朱效宁  
【摘要】:目的:建立同时测定人尿中13种邻苯二甲酸酯代谢物的高效液相色谱-串联质谱法,进而研究幼儿邻苯二甲酸酯(PAEs)暴露水平及其影响因素。方法:(1)尿样经β-葡萄糖醛酸酶水解、MAX柱固相萃取后,经SB-phenyl RRHD柱分离,负电离模式(ESI-)、多反应监测(MRM)条件下分析,同位素内标法定量,检测尿中13种PAEs代谢物的含量。(2)2011年6月至2012年1月,选取344名2009年6月15日至2010年1月20日期间在江苏省射阳县第二人民医院出生,母亲参加本课题组“宫内环境化学特暴露对婴幼儿生长发育影响”,年龄为2岁(24+1月)的幼儿;经父母知情同意,采用自行编制的调查问卷收集幼儿的基本信息及其可能接触PAEs的行为和生活习惯。(3)收集随机尿样,采用高效液相色谱-串联质谱法测定幼儿尿中13种PAEs代谢物的含量。(4)以百分位数、中位数和几何均数(GM)来描述各代谢物浓度分布状况,Spearman相关分析各代谢物间的相关性,Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验比较不同组间代谢物浓度差异,多重线性回归分析可能影响代谢物浓度的多个因素。结果:(1)建立了同时测定人尿中13种邻苯二甲酸酯代谢物的高效液相色谱-串联质谱法,13种代谢物在0.5μg/L~200μg/L的范围内均具有良好的线性关系,相关系数均≥0.999,检出限在0.1μg/L~0.2μg/L之间,回收率为94.94%-117.81%,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于10%。(2)研究选取的344名2岁幼儿中,男孩196人,占56.98%;女孩148人,占43.02%。大部分幼儿居住在集镇和农村(共占75.88%),24.12%居住在城区。(3)在所有幼儿尿中均检测到PAEs代谢物。MCHP、MOP、MiNP的浓度均低于定量限(0.5μg/L),均为未检出;MMP、MEHHP、MECPP的检出率均为100.0%;MEP、MiBP、MEOHP的检出率均为99.7%;MBP、MCPP、MEHP分别为99.4%、96.8%、89.8%:MBzP检出率最低,为22.7%。MMP、MEP、 MBP、MiBP、MCPP、MBzP、MEHP、MEHHP、MEOHP、MECPP的中位数分别为:15.73μg/L、13.99μg/L、39.30μg/L、29.23μg/L、LOQ(0.5μg/L)、2.90μg/L、 2.88μg/L、11.93μ/L。(4) Spearman相关分析结果显示,幼儿尿中PAEs各代谢物浓度间均有一定的相关性(P0.01),相关系数为0.231-0.986。MEHP、MEHHP、MEOHP、 MECPP均为邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)的代谢物,MEHHP和MEOHP相关性最高(r=0.986),MEHP与MEHHP、MEOHP、MECPP的相关系数分别为0.849、0.840、0.620,MECPP与MEHHP、MEOHP间的相关系数为0.783、0.790。MBP与MiBP、MCPP的相关性较高(r=0.839、r=0.879)。(5) Mann-Whitney U检验及多重线性回归分析结果均显示,使用含邻苯二甲酸酯的日用品和食用含邻苯二甲酸酯的食品,可增加幼儿尿中某些邻苯二甲酸酯代谢物的水平(P0.05)。结论:本课题成功建立了同时测定人尿中13种邻苯二甲酸酯代谢物的高效液相色谱-串联质谱法,方法的准确度高,重现性好,简便实用,适用于实际尿样中邻苯二甲酸酯代谢物的含量测定和人群邻苯二甲酸酯暴露评估。研究应用该检测方法准确测定了2岁幼儿尿中13种邻苯二甲酸酯代谢物的含量,在所有2岁幼儿尿中均检测到邻苯二甲酸酯代谢物;使用含邻苯二甲酸酯的日用品和食用含邻苯二甲酸酯的食品,可能会增加幼儿某些邻苯二甲酸酯的暴露,建议减少幼儿对含邻苯二甲酸酯的日用品和食品的接触,保护幼儿健康。


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