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人类Numb配体蛋白基因LNX的克隆和功能研究

赵炜  
【摘要】: 不对称细胞分裂是指1个细胞分裂为2个具有不同发育潜能的细胞,是产生细胞多样性的基本途径。Numb蛋白是神经发育中第一个被发现呈不对称分布的蛋白,是产生不对称细胞分裂的重要因素之一。我们从人胎脑cDNA文库中得到一条与小鼠Numb配体蛋白基因Lnx(Ligand of Numb Protein-X)高度同源的新基因。根据HUGO命名委员会同意,我们将其命名为人类Numb配体蛋白基因LNX。 该基因全长3737 bp,开放阅读框从236位到2134位,其编码蛋白含有4个PDZ结构域和1个与Numb蛋白的PTB结构域作用的LDNPAY基序。Northern杂交、RT-PCR和原位杂交显示,LNX mRNA在脑中的分布有一定的特异性,而且在胶质瘤组织中高表达。小鼠不同发育阶段的肾脏原位杂交显示,LNX mRNA 主要表达在肾脏髓质中,且随着肾脏的发育表达量逐渐减少。对基因芯片表达谱数据进行聚类分析,发现LNX基因的相关基因中包括FE65、Frizzled等信号传导相关基因。采用酵母双杂交系统,我们用LNX蛋白中的PDZ结构域为诱饵,筛选相互作用蛋白。我们发现Ski相互作用蛋白SKIP和PDZ结合激酶PBK可以和LNX结合,酵母结合试验、体外pulldown试验和体内免疫共沉淀试验验证了它们的相互作用。用荧光共聚焦显微镜观察发现,LNX蛋白可以分别和Numb蛋白、SKIP蛋白和PBK蛋白共定位于细胞核。我们推测,LNX蛋白可能通过其PDZ结构域募集相关蛋白到特定的细胞内区域组成蛋白复合体,参与包括Notch途径在内的信号传导途径。


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