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晶状体悬韧带离断对大分子物质转运和热休克蛋白70表达的影响

周浩  
【摘要】: 目的: 1.晶状体悬韧带是一种特殊的细胞外基质,主要由睫状体非色素上皮细胞分泌产生的fibrillin-1(微纤维蛋白-1)所组成,本研究的目的是观察悬韧带离断后,晶状体囊膜中fibrillin-1的变化,探讨悬韧带离断对晶状体囊膜组成的影响;2. 大分子物质晶状体内转运的机制目前还不十分清楚,本研究的目的是观察悬韧带离断对大分子物质晶状体内转运的影响,以探讨悬韧带在大分子物质转运中的作用;3. HSPs(热休克蛋白)在维持晶状体蛋白的三维结构中起重要作用,本研究的目的是观察悬韧带的离断是否对晶状体内HSP-70表达产生影响。 方法:以豚鼠为实验动物,手术离断下方晶状体悬韧带约120°,制作悬韧带部分离断的豚鼠模型;1.分别在悬韧带离断后1周、4周、8周和12周取眼球,免疫组化观察不同时间段fibrillin-1在离断侧囊膜中的变化。2. 制备FITC(异硫氰酸荧光黄)标记的HRP(辣根过氧化物酶,分子量约为40kD)脂质体;制备pEGFP-N1质粒(表达绿色荧光蛋白的质粒,分子量约为4.7kD),并用脂质体包裹;豚鼠悬韧带部分离断后1周、4周、8周取含晶状体的眼前段标本分别在含有FITC-HRP复合物、pEGFP-N1质粒的培养基中孵育,冰冻切片,荧光显微镜观察FITC-HRP复合物进入晶状体和pEGFP-N1质粒在晶状体内表达的情况,比较悬韧带离断侧与非离断侧的差异。3. 悬韧带离断1周、8周取豚鼠晶状体,分离囊膜、皮质,行SDS-PAGE、以HSP-70抗体行Western-blot,观察悬韧带部分离断眼与非离断眼晶状体HSP-70表达的差异。以上图像资料经图像分析系统数字处理化及测量,进行成对资料的t检验。 结果:1. 悬韧带离断8周、12周,免疫荧光显示:离断侧晶状体囊膜中fibrillin-1荧光值较非离断侧明显减少(p0.01)。2. 在晶状体赤道部上皮细胞及浅层晶状体纤维细胞内可观察到FITC-HRP复合物所发出的荧光;在悬韧带离断后8周,离断侧晶状体上皮细胞及浅层纤维细胞中FITC-HRP荧光值明显低于非离断侧(p0.05);pEGFP-N1质粒进入晶状体后,在赤道部晶状体上皮细胞中表达出绿色荧光蛋白;pEGFP-N1质粒在晶状体细胞内表达量较少,荧光较微弱,离断侧与非离断侧荧光值的比较差异无统计学意义(p0.05)。3. 晶状体囊膜中HSP-70的表达量高于晶状体皮质;悬韧带离断1周,晶状体囊膜中HSP-70表达量较对照眼明显增高(p0.05);悬韧带离断8周,混浊晶状体囊膜中HSP-70表达量较 WP=5 对照眼减低。 结论:1. 悬韧带离断后晶状体囊膜的组成逐渐发生改变,囊膜表面的悬韧带成分在较短时间内(8周)明显减少,可能影响囊膜的通透性等正常生理功能。2. 晶状体赤道部即悬韧带附着区是大分子物质晶状体内转运的活跃部位;悬韧带离断后期可影响大分子物质的晶状体内转运,囊膜中悬韧带成分的改变可能是其原因之一。3. 手术创伤所导致的应激是悬韧带离断后晶状体囊膜中HSP-70早期升高的原因;离断晚期囊膜中HSP-70表达的下降,是部分动物出现晶状体皮质密度增高的原因之一。


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