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婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究

郭红梅  
【摘要】:婴幼儿巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)感染以肝炎、肺炎多见,而较大的儿童多无症状。48.1%~78.3%的婴儿肝炎综合症有HCMV感染的证据,先天性感染的HCMV肝炎病死率可高达20%。因此,HCMV肝炎是婴儿时期常见疾病之一,对婴儿HCMV肝炎的早期诊断和治疗的进一步的研究,可为临床工作提供参考意义。 本课题从以下几个方面进行研究: 第一部分 巨细胞病毒 pp65抗原血症检测婴儿巨细胞病毒肝炎的临床研究 目的: HCMV pp65抗原血症检测HCMV感染已较为广泛应用于临床,但对于婴儿HCMV肝炎的诊断价值及其半定量检测对疾病的动态监测研究目前国内尚无文献报道。为了了解HCMV pp65抗原血症检测对婴儿HCMV肝炎患者早期诊断、疾病监测和预后评估的应用价值。方法:我们应用间接荧光染色法检测我院2001年11月-2002年10月入院76例婴儿肝炎综合症患者外周血多形核白细胞(PMNLs)中HCMV pp65抗原及半定量表达水平,并与常规ELISA方法检测血清HCMV IgM进行比较。对其中47例婴儿HCMV肝炎患儿应用更昔洛韦治疗,比较治疗前、后HCMV pp65抗原血症高低。并对更昔洛韦治疗后的患儿进行随访,了解疾病的转归和预后。结果:76例婴儿肝炎综合症患儿外周血PMNLs 中HCMV pp65抗原检测59例阳性,检出率为77.8%;HCMV IgM 41例阳性,检出率为53.9%。76例婴儿肝炎综合症中HCMV感染64例(HCMV pp65或HCMV IgM),以HCMV pp65抗原血症为标准诊断HCMV感染,HCMV IgM的敏感度仅为61.0%。59例婴儿HCMV肝炎患儿HCMV pp65抗原阳性标本中,48例(81.4%)抗原血症为高水平,11例(18.8%)抗原血症为中水平者,无低水平者。47例婴儿HCMV肝炎保肝治疗的基础上应用更昔洛韦治疗2周,治疗前42例患儿HCMV pp65抗原血症为高水平,治疗后有26例患儿HCMV pp65抗原血症为高水平,更昔洛韦治疗前、后HCMV pp65抗原水平经卡方检验,p0.01。治疗结束后39例患儿在我院门诊随访肝功能3个月以上,其中20例患儿肝功能始终正 WP=5 常,19例患儿肝功能出现波动或始终异常;20例肝功能正常的患儿中5例婴儿更昔洛韦治疗后HCMV pp65抗原血症为高水平,而19例肝功能异常的患儿中17例患儿抗原血症为高水平。肝功能正常与肝功能异常组HCMV pp65抗原血症高低经过四格表精确检验,p0.01。 结论:外周血PMNLs中HCMV pp65抗原血症检测法对婴儿HCMV感染检出率明显高于HCMV IgM检测,半定量检测HCMV pp65抗原血症高低可监测婴儿HCMV肝炎疾病动态变化,指导治疗,初步判断预后。 第二部分 婴儿肝炎综合症肝组织巨细胞病毒pp65抗原检测的研究 目的: 常规的单克隆抗体检测HCMV即刻早期抗原及早期抗原不能反应HCMV活动性感染。为了了解特异性HCMV pp65单克隆抗体的荧光免疫组化法检测婴儿肝炎综合症肝组织中HCMV活动性感染情况及与外周血几种检测方法对婴儿HCMV肝炎诊断的一致性。方法: 我们应用特异性HCMV pp65单克隆抗体的荧光免疫组化法检测2001年11月-2003年4月住院29例婴儿肝炎综合症患者肝组织标本,其中18例为胆道闭锁行手术中所取标本,11例为肝穿刺标本。结果: 29例婴儿肝炎综合症肝组织标本经荧光免疫组化法检测其中22例HCMV pp65抗原阳性,占75.9%;其中18例胆道闭锁肝组织标本中16例HCMV pp65抗原阳性,占88.9%,11例肝穿刺组织标本中6例HCMV pp65抗原阳性,占54.9%。29例婴儿肝炎综合症患儿中22例外周血PMNLs HCMV pp65阳性,10例血清HCMV IgM阳性。肝组织HCMV pp65抗原检测与血清HCMV IgM检测对婴儿HCMV肝炎的一致性为58.6%,而与外周血PMNLs HCMV pp65抗原检测对婴儿HCMV肝炎的一致性为79.3%。结论:利用特异性HCMV pp65单克隆抗体的免疫组化技术,从肝组织中直接检测到HCMV pp65抗原,提示存在活动性HCMV感染,是诊断HCMV感染可靠的依据。该方法与外周血PMNLs中HCMV pp65抗原检测具有较高的一致性。 第三部分 更昔洛韦治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的研究 目的:更昔洛韦作为治疗HCMV症状性感染的首选药物,但对婴儿HCMV肝炎治疗的认识及疗程目前存在一定的争议。为了更好的评价更昔洛韦治疗婴儿HCMV肝炎的效果,及了解所需治疗时间的长短。方法:我们选用2002年1月-6月29例婴儿HCMV肝炎为治疗组,2003年1月-6月25例婴儿HCMV肝炎为 WP=6 对照组,治疗前后应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR) 检测血浆中HCMV DNA的拷贝数,同时观察患儿肝功能的恢复,并对这些患儿进行随访。结果:婴儿HCMV肝炎更昔洛韦治疗前、后HCMV DNA的拷贝数下降明显,而对照组治疗前、后HCMV DNA的拷贝数下降不明显。治疗组和对照组肝功能在治疗后均有不同程度的恢复。治疗后治疗组与对照组肝功能(ALT、AST)无统计学意义,p0.05。停药2周时肝功能(ALT、AST)治疗组与对照组出现明显差异,经统计检验p0.05。单个疗程及多个疗程的患儿初治时血浆HCMV DNA的拷贝数存在明显差别,p0.05。结论:更昔洛韦治疗婴儿HCMV肝炎不仅可使HCMV DNA拷贝数降低,而且有助婴儿HCMV肝炎肝功能的恢复。对于初治时HCMV DNA高拷贝数的患儿推荐多个疗程间歇治疗为佳。 第四部分 婴儿巨细胞病毒肝炎UL97基因耐药性突变研究 目的:随着更昔洛韦的广泛应用,AIDS和器官移植的患者HCMV感染后相继出现更昔洛韦耐药病毒株。而对于应用更


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