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糖基化终产物通过树突状细胞促进动脉粥样硬化机制的研究

贾庆哲  
【摘要】:在糖尿病患者中,动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)等慢性血管并发症已成为主要致残和致死原因,研究表明,高级糖基化终术产物(Advanced glycosylation end products,AGEs)在动脉粥样硬化发生发展过程中起重要作用。近年来研究提出AS是一种慢性炎症和免疫性疾病,树突状细胞(dendritic cells,DCs)在免疫过程中起重要调控作用,AGEs对DCs作用的研究在国内外尚未见报导,本研究以其作为干预因素,以期探讨AGEs通过DCs促进AS发生的可能机制,全文由三个部分组成: 第一部分:糖基化终产物对树突状细胞清道夫受体A和糖基化终产物受体表达的影响 目的:探讨AGEs对DCs清道夫受体A(scavenger receptor A,SR-A)和糖基化终产物受体(receptor for advanced glycosylation end products,RAGE)表达的影响。 方法:用葡萄糖和牛血清白蛋白制备糖基化牛血清白蛋白(AGE—BSA),即糖基化终产物。用免疫磁珠分离人外周血CD14~+单核细胞,经含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)(100ng/ml)和重组人白细胞介素-4(rhlL-4)(50ng/ml)的RPMI1640培养,使其分化为DCs,第8天分别加入不同蛋白浓度的AGE=BSA(0、BSA、50、100、200、300μg/ml)干预24小时和蛋白浓度为200μag/ml的AGE-BSA干预0、6、12、24、36小时,用RT-PCR和Western-blot技术检测SRA基因和蛋白的表达。200μg/mL AGE-BSA干预DCs24小时,用RT-PCR和Western-blot技术检测RAGE基因和蛋白的表达。 结果:(1)与空白对照相比,浓度为50μg/ml和100μg/ml AGE-BSA干预24小时即可分别上调SR-A mRNA和蛋白的表达(P0.05),200μg/ml时达峰值(P0.01),在干预的不同时间组,12h和24h可分别上调SR-A mRNA和蛋


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