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卵巢透明细胞癌Snail表达及雌激素对其表达的调控

丁景新  
【摘要】:目的: 通过卵巢透明细胞癌患者手术组织切片检测及细胞系体外实验,探讨卵巢透明细胞癌ER、Snail、E-Cadherin表达情况,以及Snail对卵巢透明细胞癌E-cadherin、MMP-2表达的调控,及17β雌二醇对卵巢透明细胞癌Snail表达的调控。 材料与方法: 体外培养卵巢透明细胞癌ES-2及SKOV3细胞系,RT-PCR检测ERα、ERβ、MTA3、Snail、E-cadherin、MMP-2 mRNA表达,Western Blot检测ERα、ERβ、E-cadherin蛋白表达,免疫细胞化学染色检测Snail表达,明胶酶谱法检测金属基质蛋白酶活性。免疫组化法检测2000年1月-2004年12月在复旦大学附属妇产科医院手术的20例卵巢透明细胞癌(CCA)及26例卵巢浆液性癌(SAC)石蜡包埋标本中Snail、E-Cadherin、雌激素受体(ER)的表达。 构建针对Snail基因的表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail,质粒转染ES-2细胞系及SKOV3细胞系,细胞—基质粘附实验检测细胞粘附能力的改变,改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RT-PCR检测ES-2及SKOV3细胞E-Cadherin、MMP-2 mRNA表达的改变情况,免疫组化法检测MMP-2表达,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性,Westernblot检测E-Cadherin蛋白表达变化情况。 ES-2及SKOV3细胞系去激素培养7d后加入17β雌二醇10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L,MTT法检测ES-2细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期,改良的Boyden小室检测ES-2细胞侵袭力、运动力的变化,RT-PCR检测ES-2及SKOV3细胞MTA3、snail、MMP-2 mRNA表达的改变情况,免疫组化法检测Snail、MMP-2表达,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性,Westernblot检测E-Cadherin蛋白表达变化。ES-2细胞系针对Snail进行RNA干扰,加入17β雌二醇,RT-PCR检测RNAi组和对照组ES-2细胞MMP-2 mRNA表达变化,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果: 卵巢透明细胞癌ES-2细胞系的表达特点为ERα阴性,MTA3表达低于ERα阳性的SKOV3细胞,Snail蛋白表达高于SKOV3细胞,E-cadherin表达为阴性,MMP-2表达为阳性。对组织切片的检测表明,相对于卵巢SAC,卵巢CCA的特点是ER的低表达,Snail的高表达和E-Cadherin的低表达;Snail表达与卵巢CCA临床分期无关,Ⅰ期卵巢CCA即存在Snail的高表达;卵巢SAC标本中Ⅲ-Ⅳ期肿瘤中Snail表达明显高于Ⅰ-Ⅱ期(P0.05),3级Snail表达明显高于2级(P0.05);卵巢CCA及SAC手术标本中Snail与ER、E-Cadherin表达负相关,


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