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酶学诱发玻璃体后脱离的实验研究

王志良  
【摘要】:目的:通过在兔眼玻璃体腔中注射透明质酸酶或纤维蛋白溶解酶或两者联合应用,探索能否通过酶学诱发出完全性玻璃体后脱离(PVD),同时又没有明显眼内毒性。通过超微结构研究玻璃体视网膜界面的解剖结构及蛋白成分,揭示PVD的发生机制,为临床应用奠定理论、实验基础。 方法:在兔眼玻璃体腔中注射透明质酸酶或纤维蛋白溶解酶或两者联合应用。通过临床观察、B超、扫描电镜判断有无PVD发生。临床观察、眼电生理检查(ERG)、透射电镜、TUNEL法及RT-PCR测定c-fos基因的方法检测视网膜细胞的凋亡情况,研究有无眼内毒性。通过免疫电镜技术检测玻璃体视网膜界面层粘连蛋白、纤维连接蛋白等分子胶的分布及分光光度计测定纤维蛋白溶解酶的活性浓度,探讨PVD发生的作用机理。 结果:(1)兔眼玻璃体腔内注射20U透明质酸酶7天内不能诱发出PVD(8/8)。(2)兔眼玻璃体腔内注射1U纤维蛋白溶解酶7天内只能诱发出部分性PVD87.5%(7/8)。(3)兔眼玻璃体腔内注射0.5U纤维蛋白溶解酶+20U透明质酸酶能诱发出部分性PVD(5/8),(4)兔眼玻璃体腔内注射1U纤维蛋白溶解酶+20U透明质酸酶1小时后能诱发出完全性PVD91.6%(11/12),0.5小时后能诱发出部分性PVD(4/4)。(4)ERG、透射电镜、TUNEL法及RT-PCR测定c-fos基因的方法检测1~4U纤维蛋白溶解酶或和20U透明质酸酶对视网膜细胞的形态和功能检测均未见明显眼内毒性反应。(5)免疫电镜证实纤维蛋白溶解酶能特异性溶解玻璃体视网膜界面中的层粘连蛋白、纤维连接蛋白;透明质酸酶能加强纤维蛋白溶解酶溶解层粘连蛋白、纤维连接蛋白;透明质酸酶自身不能溶解层粘连蛋白、纤维连接蛋白。 结论:兔眼玻璃体腔内注射1U纤维蛋白溶解酶+20U透明质酸酶1小时后能诱发出完全性PVD,0.5小时后仅能诱发出部分性PVD。4U以下纤维蛋白溶解酶+20U透明质酸酶眼内注射没有明显眼内毒性反应,眼内注射有效剂量与安全剂量之间范围较大。1U纤维蛋白溶解酶单独应用只能诱发出部分性PVD。20U透明质酸酶不能诱发出PVD。快速诱发完全性玻璃体后脱离的药物应既能溶解玻璃体视网膜界面的层粘连蛋白、纤维连接蛋白又能快速液化玻璃体使药物迅速弥散作用于玻璃体视网膜界面。


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