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完全胸腔镜下心脏分子搭桥与冠脉搭桥的实验研究

王强  
【摘要】: 缺血性心肌病的主要治疗手段是冠脉搭桥、介入和药物治疗。近年来,逐渐兴起了细胞移植和基因移植的“分子搭桥”。血管生成素-1(ANG-1)作用于血管内皮细胞和间质细胞,有促进血管形成、维持血管的完整性和调节血管通透性的作用。为了探讨完全胸腔镜下血管生成素-1注入心肌的“分子搭桥”和冠脉搭桥的可行性,我们进行了本课题的研究。 1.血管生成素-1重组腺病毒的构建 以RT-PCR方法扩增编码完整的ANG-1。将纯化的ANG-1 cDNA和载体PUC119分别用Kpn I and BamH I进行酶切,酶切产物经T_4连接酶连接。转染感受态细胞,筛选菌落进行酶切鉴定,作DNA序列分析。克隆到E1与E3缺失的AD5腺病毒载体PaxCAwt,转化293感受态,挑取阳性克隆,抽提粘粒。应用Cosmid-TPC磷酸钙共沉淀法将含有左向转录表达单元的重组载体PaxCAw与TPC共转染293细胞,经氯化铯梯度离心,保存于—70度备用。 2.完全内镜下慢性缺血模型的建立 应用Ameroid缩窄环建立左回旋支的慢性缺血模型。家猪28只,体重30~45kg,雌雄不限。手术在无菌条件下进行,戊巴比妥(30mg/kg)麻醉,左胸壁打三个小孔,在完全内镜下将Ameroid缩窄环套入猪的左冠状动脉回旋支。6周后冠脉造影提示回旋支完全闭塞。本研究在完全胸腔镜下制作慢性心肌缺血模型,将微创技术应用到动物实验中,可以减轻手术创伤,有利于动物的术后恢复。国内外未见完全胸腔镜下制作动物心肌缺血模型的相关文献报道。 3.完全内镜下AD·ANG-1注入缺血心肌 在临床上,动脉粥样硬化心脏病病人的冠状动脉是逐渐狭窄直至最后闭塞的,在这一过程中,心肌缺血区往往有侧支循环建立。尽管这些新生的侧支循环可以推迟心肌梗死的发生,但是最终仍然无法提供足够的血供以阻止梗死的发生。本研究的目的是在完全胸腔镜下将AD·ANG-1注射入猪的缺血心肌,以观察缺血状况是否改善,并且探讨完全胸腔镜下进行心脏分子搭桥手术的可行性。20只猪的左冠脉回旋支置放Ameroid缩窄环,手术后6周,完全胸腔镜下,在14只猪的缺血心肌注射AD·ANG-1,另外4只猪作为对照组。术后约6周,给予ECT,UCG和心肌免疫组化等检查。发现实验组心肌新生血管密度显著高于对照组,部分心肌结构有所恢复。完全胸腔镜手术具有微创的特点,所以有可能成为分子或细胞搭桥治疗缺血性心脏病的一种新的手术方法。国内外未见完全胸腔镜下分子搭桥的相关实验和临床报道。 4.完全胸腔镜冠脉搭桥 本研究利用4头猪和76条狗开展了非机器人完全内镜下冠脉搭桥手术的可 行性探讨。实验动物取左侧抬高30°卧位,经左侧腋后线第三肋间插入胸腔镜镜头,在胸腔镜引导下在胸骨旁第二和第五肋间插入手术器械。找到乳内动脉并将其从第一肋间游离到第五肋间。注射肝素1mg╱kg,镜下放置动脉夹,修剪乳内动脉远端,并检查血流情况。取股动脉作为血管桥。切开心包,辩明左冠状动脉前降支、对角支和回旋支。注意不要将前降支与对角支相混淆。游离靶血管,剪口。用7—0无损伤缝线吻合桥血管与冠脉血管。由外向内进针首先缝合吻合口足尖,然后仍然由外向内缝合侧面和足跟。每根冠脉的吻合时间为31.3±4.9分钟(20~72分钟)。术后吻合口的通畅率高。实验结果表明完全胸腔镜非体外多支冠脉搭桥术切实可行,值得进一步开展临床研究。因为完全胸腔镜下搭桥手术具有微创价值,所以将来有可能成为冠脉搭桥手术方式之一。


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