哮喘神经内分泌免疫网络紊乱及补肾益气药对其调节作用的研究

【摘要】： 目的： 研究哮喘模型大鼠不同时期下丘脑—垂体—肾上腺轴(Hypothalamic—Pituitary-Adrenal Axis，HPAA)的变化规律及其与免疫炎性因子的相关性；研究补肾益气中药在哮喘防治中的作用机制。 方法： 实验Ⅰ：以卵蛋白(ovalbumin，OA)致敏和激发Brown Norway大鼠制作哮喘模型。实验分5组，每组8只。A组：生理盐水对照组：正常BN大鼠，以生理盐水代替卵蛋白致敏和雾化吸入1次；B组：哮喘即发组：以OA激发哮喘1次，激发20分钟后即刻取标本检测；C组：哮喘7天组(模型鼠连续激发7天，每天1次，每次持续20分钟)；D组：哮喘缓解7天组(同C组处理后，缓解7天)；E组：哮喘反复发作组(发作7天，缓解7天，再发7天)。所有大鼠在最后一天雾化吸入卵蛋白后半小时麻醉采标本。采用RT—PCR检测下丘脑组织中的促肾上腺皮质激素释放激素CRHmRNA，酶联免疫吸附试验(Enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)检测IL-6、IL-4、IFN-γ和皮质酮(corticosterone，CORT)，放射免疫法(Radio-immunity assay，RIA)检测ACTH。 实验Ⅱ：造模方法同实验Ⅰ的E组。F组：模型对照组；G组：低剂量中药组；H组：中剂量中药组；I组：高剂量中药组。在缓解期的第一天给药，共14天。G、H、I组分别给予不同剂量补肾益气药(淫阳藿、黄芪组成)。F组给予等剂量的生理盐水灌胃。检测指标和方法同实验一。 结果： 实验Ⅰ： 1．HPAA的变化： 经对数转换5组CRHmRNA比较差别具有统计学意义(P＜0.01)。其中两两比较，哮喘1天组较生理盐水对照组明显升高(P＜0.01)。哮喘反复发作组、哮喘7天组和缓解期组分别与哮喘1天组比较CRHmRNA均明显降低(P＜0.01)。 经对数转换5组ACTH比较差别具有统计学意义(P＜0.05)。其中，卵蛋白激发哮喘1天组ACTH较生理盐水对照组有上升趋势，但无统计学意义。反复发作的哮喘组ACTH明显降低，与哮喘1天组和缓解期组比较差别具有统计学意义(P＜0.01)。 两两比较缓解期组和反复发作组CORT与哮喘1天组比较明显降低，差别具有统计学意义(P＜0.05)。 2．细胞因子的变化 方差分析结果显示5组比较IL-4差别具有统计学意义(P＜0.01)。两两比较，哮喘7天组、缓解期组和反复发作组分别与哮喘1天组比较IL—4明显升高，(P＜0.05)；哮喘缓解期组和反复发作组分别与生理盐水对照组比较IL—4明显升高(P＜0.05)。 5组比较IFN—γ具有统计学差异(P＜0.01)。两两比较哮喘7天组、缓解期组分别与哮喘1天组比较IFN—γ明显降低(P＜0.01)；哮喘缓解期组与生理盐水对照组比较IFN—γ明显降低，(P＜0.05)。其余各组两两比较差别无统计学差异(P＞0.05)。 IL-6方差分析结果显示5组比较差别具有统计学意义(P＜0.01)。两两比较哮喘7天组与哮喘1天组比较IL-6明显升高(P＜0.05)；哮喘缓解期组与哮喘1天组比较IL-6显著升高，(P＜0.01)；哮喘反复发作组与其余各组两两比较IL-6明显升高，差别有统计学意义。 3．IL-6与HPAA的相关性：经相关性检验发现IL-6与ACTH显著负相关，相关系数r=—0.325，P=0.043，而IL-4与ACTH经相关性检验结果显示IL-4与ACTH无相关性，r=—0.053，P=0.747。 4．Th1／Th2细胞因子相关性：IL-4与IFN—γ数据经相关性检验显示两者呈显著负相关，相关系数r：—0.339，P=0.017。 实验Ⅱ： 1．补肾益气药对HPAA的调节作用：在三个用药组之间，随剂量增加，CRHmRNA呈上升趋势，且高剂量中药组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。高剂量中药组和中剂量中药组与低剂量中药组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。 随药物剂量增加，ACTH水平呈上升趋势。其中中剂量中药组与对照组和低剂量中药组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)；高剂量中药组与对照组和低剂量中药组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。 随用药剂量增加，CORT呈上升趋势，其中两两比较高剂量中药组与对照组比较差别具有统计学意义(P＜0.05)。 2．补肾益气药对细胞因子的影响：经方差分析结果提示各组IL-6、IL-4、IFN—γ比较差别无统计学意义。其中两两比较IFN—γ中剂量组较对照组明显降低，差别具有统计学意义。 结论： 哮喘初发时HPAA功能活跃，而反复发作的慢性阶段，HPAA功能相对低下，神经内分泌激素和糖皮质激素分泌减少，IL—4合成增加，IFN—γ减少，这种改变使得哮喘的内源性抗炎成分减少，致炎因子增加，慢性炎症进展；而IL-6合成增加可能是继发于HPAA功能低下，形成对HPAA的反馈性调节，有望作为肾阳虚微观辩证的指标之一。中药补肾益气药可调节哮喘HPAA的功能紊乱，上调CRH、ACTH和CORT的表达合成，作用靶点在下丘脑或下丘脑以上。该中药有望进一步应用于哮喘的治疗，调节神经内分泌免疫网络紊乱，改善HPAA功能，改善内源性抗炎机制；与糖皮质激素合用，可减少激素用量，减轻激素副作用，具有较好的应用前景。