收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DEC1/Sharp2/Stral3基因的克隆和功能研究

姚纪花  
【摘要】: RNA干扰是指通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列(dsRNA),使内源mRNA降解,从而导致转录后的基因沉默。RNA干扰广泛存在于细菌、植物和动物中。脊椎动物中,长链dsRNA能引发干扰素反应而引起非特异性的mRNA降解,而21-23nt长度的siRNA能特异性介导基因的沉默,因而被广泛应用于基因功能研究。目前斑马鱼siRNA干扰方面的报道极少。本文中,我们开展了U6启动子驱动的siRNA介导的斑马鱼RNA干扰研究。选择功能明确且与表型相关的4个斑马鱼内源基因Myf5,Dlg3,Mitfa(Nacre)和Mitfb和GFP报告基因为靶基因,分别选2—4个靶位点,构建U6启动子驱动的siRNA表达载体,显微注射至斑马鱼受精卵,追踪观察胚胎发育。根据表型分析结合整胚原位杂交结果,探测siRNA对斑马鱼体内基因表达的影响。结果表明:1.)U6启动子驱动的siRNA能抑制斑马鱼靶基因的表达,但抑制作用不完全。2.)在所选的靶位点中,siGFP对斑马鱼体内的GFP表达无明显的抑制作用;3.)针对不同的靶位点,siRNA介导的干扰效果有差异。斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰是否存在非特异性,有


知网文化
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978